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艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)是指艰难梭菌引起的感染。艰难梭菌是有芽孢的,产毒素的格兰阳性菌,CDI临床表现多样,可为无症状携带者,轻度腹泻,结肠炎,甚至严重的伪膜性肠炎。近年来,CDI的发病率呈逐年上升趋势,表现为复发率,严重程度及病死率逐年增高。从复发性艰难梭菌感染发病机制的研究发现,肠道菌群失调是其中很重要的因素。粪菌移植(Fecal microbiota transplantation,FMT)是指将健康志愿者大便中的健康菌群通过一定的方式移植到患病者的肠道以此来恢复其肠道微生态的稳态与平衡。目前FMT治疗最成功的疾病为复发性艰难梭菌感染,治愈率达80%-90%。而目前国内外对于儿童粪菌移植的临床研究尚不完善,尤其在儿科尚缺乏相关的临床数据。现阶段,16S rRNA基因被认为是细菌鉴定的黄金标准,基于16S rRNA基因分析技术,尤其是二代测序(Deep Sequencing)技术的应用为更详尽的肠道菌群结构的测定,评估抗生素使用对肠道菌群的影响,评估益生菌对肠道菌群结构影响的准确性和敏感性提供了最新的手段,同样也为FMT治疗前后的肠道菌群变化分析带来了快捷准确的分析方法。本次回顾性研究将更深入分析FMT治疗复发性艰难梭菌感染的疗效,并通过16S rRNA深度测序分析FMT后粪菌移植供者肠道菌群在受者肠道的定植情况。第一部分:粪菌移植治疗儿童复发性艰难梭菌感染的临床疗效评价目的:探讨粪菌移植治疗儿童复发性艰难梭菌感染的临床疗效。方法:分析我院消化科2014年-2016年收治的6例复发性艰难梭菌感染接受粪菌移植治疗的患儿临床资料。通过分析患儿的性别,年龄,临床表现,腹部CT改变,FMT治疗的次数,剂量及方式来评价粪菌移植治疗儿童复发性艰难梭菌感染的临床疗效。结果:入组的6例患儿中,男4例,女2例,平均年龄2.75(0.5-6)岁。2名患儿经过单次FMT治疗达到临床缓解,4名患儿经过多次FMT治疗达到临床缓解,单次缓解率为33%。6名患儿在FMT实施及治疗随访中均未发生严重的不良反应。结论:FMT可用于治疗儿童复发性、难治性CDI,并且是安全,可耐受的。第二部分:16S rRNA深度测序分析FMT移植前后肠道菌群变化目的:通过16S rRNA深度测序分析FMT后粪菌移植供者肠道菌群在受者肠道的定植情况。方法:入组上海市儿童医院2015年-2016年收治的4例复发性艰难梭菌感染患儿及其供者和10名健康志愿者,分别收集粪菌移植前,移植后1天、1周、2周、1月的患儿及其供者的大便标本和10例健康儿童的大便标本,应用16S rRNA的方法分析其在门纲目科属水平的肠道菌群组成情况,并分析各组微生物群落差别,比较粪菌移植前后肠道菌群的动态变化情况。结果:RCDI患儿肠道菌群多样性下降。在门纲目科属水平上,RCDI患儿肠道菌群与健康志愿者的肠道菌群构成存在差异。在门水平上,肠道内拟杆菌门(Bacteroidetes)减少,变形菌门(Proteobacteria)增多;在纲水平上,患儿γ变形菌纲(Gammaprotebacterias)增多,拟杆菌纲(Bacteroidia)下降;在目水平上,患儿肠杆菌目(Enterobacteriales)增多,拟杆菌目(Bacteroidales)下降;在科水平上,患儿肠道菌群以肠杆菌科(Enterobacteriaceae)升高,拟杆菌科(Bacteroidaceae),胃瘤球菌科(Ruminococcaceae)下降;在属水平上,RCDI患儿克雷伯菌属(klebsiella),欧文氏菌属(erwinia)升高,拟杆菌属(Bacteroides),柔嫩梭菌属(Faecalibacterium),变形杆菌属(Sutterella)下降。在移植后,随着症状的消失,患儿肠道菌群多样性增加,在门纲目科属水平上也发生变化,并逐渐接近于供者。结论:RCDI患儿肠道菌群多样性下降。FMT可显著增加RCDI患儿菌群的多样性,并逐渐接近于供者。供者可在短期内改善患儿肠道菌群。本研究利用高通量测序方法研究了RCDI患儿FMT前后肠道菌群的变化情况,为以后更多的研究儿童各疾病肠道微生态成为了可能。