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磷是海洋浮游植物生长过程中不可或缺的营养元素。但在一些寡营养盐海域的透光层,无机磷浓度极低,影响浮游植物的生长。在无机磷限制条件下,不同形式的有机磷可被利用,其生物可利用性对磷的生物地球化学循环和初级生产力起着重要作用。大量生物培养实验表明,含C-P键有机磷是海洋中的一类重要磷源,如草甘膦(Glyphosate,GLYP)及其主要降解产物氨甲基膦酸(Aminomethylphosphonic acid,AMPA)、2-氨乙基膦酸(2-Aminoethylphosphonic acid,2-AEP)、2-氨基-3-膦酰基丙酸(2-Amino-3-phosphonopropionic acid,2-AP3)等可作为选择性磷源被微生物利用。由于缺乏合适的海水基底中含C-P键有机磷的分析方法,海洋生物学家无法得知培养实验过程中有机磷浓度如何变化,这使得一些重要科学推论缺乏直观的数据支持,从而影响对含C-P键有机磷生物可利用性的进一步研究。本研究针对这些需求,建立了回收率高、重现性好、相对灵敏、简单快速的海水基底中几种典型含C-P键有机磷的分析方法。主要内容和结果如下:(1)基于芴甲氧羰酰氯(9-Fluorenylmethylchloroformate,FMOC-C1)与 GLYP和AMPA反应生成荧光产物,建立了高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)-荧光检测器(Fluorescence detector,FLD)测定海水基底中GLYP和AMPA的方法。实验中优化了衍生反应条件,包括FMOC-Cl浓度、硼酸盐缓冲溶液的pH和添加量、混匀时间和衍生反应时间等。利用本方法测定海水样品时简单、快速,不需要任何净化和除盐的步骤,衍生反应在30 min内完成。在优化的实验条件下,方法线性范围宽且线性良好(R2>0.990),海水基底中的检出限为:GLYP 0.60 μg/L、AMPA 0.30 μg/L,三个不同操作者平行测定人工海水试样24次的相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为:RSD(GLYP)=14.0%、RSD(AMPA)=3.1%。本方法已成功应用于海水藻类培养实验中GLYP和AMPA浓度的测定,GLYP和AMPA在90%以上海水培养样品中的加标回收率为80-120%,在其它不同水样中的加标回收率良好,说明方法受基底干扰较小。(2)基于邻苯二甲醛(o-Phthalaldehyde,OPA)-乙硫醇(Ethanethiol,ET)与2-AEP反应生成荧光产物,建立了 HPLC-FLD测定海水基底中的2-AEP的方法。实验中优化了色谱条件和衍生条件,包括FLD的激发和发射波长、流动相中乙酸铵的浓度和pH、OPA-ET衍生剂的组成和添加比例、衍生反应时间等。在优化的实验条件下,方法线性范围宽且线性良好(R2>0.990),平行测定不同基底中三种浓度级别2-AEP试样的重现性好:RSD≤7.8%(n=7),海水基底中2-AEP的检出限为15.0 μg/L。本方法已成功应用于海水藻类培养实验和不同基底降解实验中2-AEP浓度的测定,海水培养样品中2-AEP的加标回收率均在79.3-99.3%之间,其它不同水样中2-AEP的加标回收率良好,说明方法受基底干扰较小。(3)基于OPA-ET与2-AP3和2-AEP反应生成荧光产物,建立了 HPLC-FLD测定海水基底中的2-AP3和2-AEP的方法。在实验优化条件下,方法线性范围宽且线性良好(R2>0.999),平行测定人工海水基底中三种浓度级别试样7次的重现性好:RSD(2-AP3)≤1.7%、RSD(2-AEP)<.1%,海水基底中 2-AP3 和2-AEP的检出限均为12.0μg/L。在包括海水培养样品的不同水样中,2-AP3的加标回收率在72.6-98.6%之间,2-AEP的加标回收率在83.0-103.8%之间,说明方法受基底干扰较小。研究过程中分析了两种目标物在衍生速率和衍生产物稳定性上的区别,为以后建立更多含C-P键有机磷同时测定的方法提供了研究基础。