【摘 要】
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第一部分绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1运动能力的调控作用目的:研究绿原酸对铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达(PAO1Δwsp F)菌株、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP低表达(PAO1/Plac-yhjH)菌株和PAO1野生株(PAO1)的泳动(swimming)、集群(swarmming)运动和蹭行运动(twitching)的影响,探究绿原酸通过c-d
【基金项目】
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项目名称:绿原酸通过c-di-GMP信号通路调控铜绿假单胞菌生物被膜感染的作用及机制研究,项目合同编号:81760743,项目来源:国家自然科学基金课题,项目起止时间:2018.01-2021.12; 项目名称:异绿原酸对铜绿假单胞菌烟曲霉菌混合生物被膜c-di-GMP信号通路调控的作用机制研究,项目合同编号:2016GXNSFAA380297,项目来源:广西自然科学基金课题,项目起止时间:201
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第一部分绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1运动能力的调控作用目的:研究绿原酸对铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达(PAO1Δwsp F)菌株、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP低表达(PAO1/Plac-yhjH)菌株和PAO1野生株(PAO1)的泳动(swimming)、集群(swarmming)运动和蹭行运动(twitching)的影响,探究绿原酸通过c-di-GMP信号通路对运动能力调控作用方法:两倍稀释法测定绿原酸对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC);实验组分为PAO1Δwsp F组、PAO1、PAO1/Plac-yhjH组,观察以接种点为中心的细菌运动形状及轨迹,测量运动环来评估细菌的运动能力。结果:绿原酸能抑制PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1的运动能力,并且对不同的运动方式抑制作用的强弱不同。结论:绿原酸能通过c-di-GMP抑制铜绿假单胞菌的运动能力,胞内不同c-di-GMP浓度铜绿假单胞菌的运动轨迹不同,绿原酸能抑制它们各自形成的运动轨迹,提示对其鞭毛运动有着调控作用。第二部分绿原酸对铜绿假单胞菌生物被膜的破坏作用目的:研究绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1早期和晚期生物被膜的破坏作用。方法:实验组分为PAO1野生株组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达(PAO1Δwsp F)组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP低表达(PAO1/Plac-yhjH)组,结晶紫染色法测定绿原酸对铜绿假单胞菌早期生物被膜和晚期生物被膜清除能力的影响。结果:绿原酸能破坏PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1形成的生物被膜。结论:绿原酸能通过c-di-GMP调控铜绿假单胞菌生物被膜的形成,对早期生物被膜的清除能力较好,对晚期生物被膜的清除能力没有显示出浓度依赖性。第三部分绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1侵袭肺泡上皮细胞的影响目的:研究绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1侵袭肺泡上皮细胞系细胞的影响。方法实验组分为PAO1野生株组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达(PAO1Δwsp F)组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP低表达(PAO1/Plac-yhjH)组,通过结晶紫染色和荧光染色在显微镜下观察铜绿假单胞菌对肺泡上皮细胞系细胞黏附作用。结果:绿原酸能抑制PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1对肺泡上皮细胞系细胞黏附作用。结论:绿原酸能通过c-di-GMP调控铜绿假单胞菌生物被膜对肺泡上皮细胞系细胞黏附作用,并且影响他们的黏附方式。第四部分绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1生物被膜形成的分子调控作用目的:通过绿原酸对PAO1Δwsp F、PAO1/Plac-yhjH和PAO1形成的生物被膜干预作用,探究绿原酸对铜绿假单胞菌生物被膜形成相关分子的调控作用。方法实验组分为PAO1野生株组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP高表达(PAO1Δwsp F)组、铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP低表达(PAO1/PlacyhjH)组,通过实时荧光定量PCR和荧光酶标仪来测定铜绿假单胞菌早其生物被膜以及晚期生物被膜中的基因表达量以及c-di-GMP蛋白的表达量结果在早期生物被膜中,PAO1菌株和PAO1△wsp F菌株PLEQ、WSPR和PILZ的相对表达量减少的,PAO1/Plac-yhjH菌株WSPR和PILZ的相对表达量是增加的;在晚期生物被膜中,PAO1/Plac-yhjH菌株PILZ的相对表达量增加,PAO1菌株FLEQ的相对表达量增加,PAO1△wsp F的PLEQ、和PILZ的相对表达量减少的。绿原酸抑制PAO1、PAO1△wsp F菌株的cdi-GMP信号分子产生;绿原酸促进PAO1/Plac-yhjH菌株的c-di-GMP信号分子产生。结论:绿原酸对胞内不同c-di-GMP浓度铜绿假单胞菌的生物被膜形成相关基因表达量和c-di-GMP生成的影响不同,并且早期生物被膜组和晚期生物被膜组之间也不同。
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