【摘 要】
：
背景和目的结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一,其死亡率在所有恶性肿瘤中位居第二。其主要的治疗方式是手术为主,辅以化疗和放疗的综合治疗。化疗抵抗和转移是CRC患者预后差、五年生存率低的主要原因。干细胞转录因子SOX2可以驱动肿瘤干细胞特性,促进肿瘤发生和发展。细胞自噬作为一种细胞内降解细胞质蛋白和细胞器的重要机制,可以调节多种参与肿瘤发生、增殖和侵
论文部分内容阅读
背景和目的结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一,其死亡率在所有恶性肿瘤中位居第二。其主要的治疗方式是手术为主,辅以化疗和放疗的综合治疗。化疗抵抗和转移是CRC患者预后差、五年生存率低的主要原因。干细胞转录因子SOX2可以驱动肿瘤干细胞特性,促进肿瘤发生和发展。细胞自噬作为一种细胞内降解细胞质蛋白和细胞器的重要机制,可以调节多种参与肿瘤发生、增殖和侵袭的蛋白质,从而促进肿瘤恶性表型。我们前期研究发现SOX2能够促进CRC细胞化疗抵抗、干性以及上皮-间质转化,但其中具体分子机制有待阐明。本研究旨在探索SOX2是否可以通过调控自噬促进CRC细胞化疗抵抗、恶性表型及其具体分子机制,为CRC诊治提供新思路。研究方法利用质粒转染或慢病毒转染构建SOX2过表达或沉默的CRC细胞系,通过qRT-PCR和Western blot检测转染细胞中自噬标志物表达,共聚焦显微镜检测LC3B荧光小点数量,透射电镜检测自噬小体数量。利用细胞活性实验、成球实验、划痕实验和Transwell侵袭实验分析自噬激活或抑制对CRC细胞恶性表型的影响以及自噬是否参与SOX2介导的化疗抵抗和恶性表型。利用Western blot筛选被SOX2调控的自噬基因,构建Beclin1过表达或沉默的CRC细胞系,并通过细胞功能实验验证Beclin1在SOX2介导的自噬激活、化疗抵抗及恶性表型中的作用。利用染色质免疫沉淀、双荧光素酶报告基因、构建启动子截短子和突变子等实验探索SOX2调控Beclin1的机制。通过90对CRC组织芯片及临床随访资料分析SOX2和Beclin1的临床表达特征,并通过荷瘤裸鼠模型探索SOX2-Beclin1/Autophagy轴对体内结直肠癌生长和化疗抵抗的作用。结果1.过表达SOX2显著上调LC3Ⅱ/Ⅰ表达,并促进LC3B荧光小点和自噬小体形成。2.激活自噬促进CRC细胞恶性表型,且阻断自噬可抑制SOX2介导的恶性表型。3.Beclin1是SOX2激活自噬的重要分子,敲低Beclin1可抑制SOX2介导的自噬激活和CRC细胞恶性表型。4.过表达SOX2增加Beclin1全长启动子荧光素酶活性,截断Beclin1启动子-1515～-1029区域或缺失突变-1400～-1390序列（ATCATAACAGA）显著抑制荧光素酶活性。5.Beclin1在CRC组织表达上调,且Beclin1高表达与结直肠癌AJCC分期、生存预后以及SOX2表达相关。6.敲低SOX2抑制裸鼠皮下肿瘤生长,联合应用自噬抑制剂CQ和化疗药物伊立替康显著增加化疗效果,且联合化疗效果在SOX2敲低组更显著。结论1.SOX2通过激活自噬促进CRC细胞化疗抵抗、干性及EMT。2.SOX2 通过与 Beclin1 启动子结合（-1400～-1390,ATCATAACAGA）转录上调Beclin1表达从而增强自噬和促进CRC细胞化疗抵抗、干性和EMT。3.SOX2-Beclin1/Autophagy信号轴促进CRC体内生长和化疗抵抗。
其他文献
背景:伴随着当今社会交通事故、高处坠落等的日益增加,距骨颈骨折成为了临床医生们关注的一个重点。在当今的治疗中,包括保守治疗和手术治疗,多数外科医生建议采用手术的方式进行治疗,对距骨颈骨折采用切开复位内固定的治疗方式已逐渐成为首选方案。在临床工作中,对于距骨颈骨折的手术治疗有许多内固定方法的选择,包括克氏针固定和螺钉固定等,但是后续并发症的发生和患者预后好坏仍是个关键的问题。但是当距骨颈部位的骨头发
背景:前路腰椎融合术（Anterior Lumbar Interbody Fusion,ALIF）是治疗创伤性或退行性腰椎间盘疾病的常用外科手术技术。腰段自主神经（Lumbarautonomic nerves）损伤是腰椎前路手术中一个严重的并发症,然而临床医生对腰段自主神经的解剖学特点目前理解并不深刻,限制了其临床应用。目的:本研究拟阐明男性腰椎前方的腰段自主神经的空间位置、形态学分布以及与周围解
研究背景青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis,AIS）是发生于青春期最常见的脊柱畸形,对于轻度AIS患者,运动治疗对AIS有一定的疗效,但还存在一定的争议,尚未形成共识。利用三维有限元分析技术进行脊柱侧凸的生物力学研究已有多年历史,该技术可以克服传统实验方法需大量实体标本、数据处理繁琐复杂等方面的局限性,已成为研究脊柱侧凸生物力学的良好方法。但目前针
背景和目的单克隆免疫球蛋白血症（MG）合并慢性肾脏病（CKD）可见于恶性血液系统疾病如多发性骨髓瘤、淋巴瘤等患者,也可见于非恶性血液系统疾病如有肾脏意义的单克隆免疫球蛋白血症（MGRS）和临床意义未明的单克隆免疫球蛋白血症（MGUS）患者。MGRS是一种产生肾毒性单克隆免疫球蛋白的非恶性（非侵袭性）B淋巴细胞或浆细胞疾病。与MGUS的良性病程不同,MGRS的病程呈进展性,可出现肾功能衰竭,死亡等不
研究背景精确的术前规划对全髋关节置换（THA）术中精准重建是至关重要的一步,它可降低术后并发症和提高患者临床满意度。目前大多数医院仍使用二维（2D）模板对THA进行术前规划,但因受放大率与体位等因素影响导致其准确性偏低。少数医院使用三维（3D）软件对THA进行三维术前规划,虽然其准确性高,但操作繁琐、耗时。基于AI技术的三维术前规划软件—AI HIP可快速识别髋臼和股骨形态,选择最适假体型号,操作
目的构建雷珠单抗小分子水凝胶缓释体系,探讨雷珠单抗小分子水凝胶通过结膜下给药方式对于角膜新生血管抑制作用及其与雷珠单抗注射液对角膜新生血管的抑制效果是否存在差异,为抑制角膜新生血管生长提供新的治疗方向。方法将40只健康清洁的SD大鼠随机分为5组:空白对照组8只（A组）。另外32只SD大鼠均以右眼为实验眼,碱烧伤法建立大鼠角膜新生血管模型后随机分为模型对照组（B组）、结膜下注射空白小分子水凝胶组（C
目的:促进慢性病早期发现、降低高危人群发病风险,持续探索优化适合实际、适合中国人群的慢性病筛查干预的适宜技术和管理模式,推动建立慢病筛查干预的长效机制。方法:1.选取自2015年7月至2017年6月期间来南方医院健康管理科进行健康体检并完成生活方式问卷评估的共4372例健康体检者,通过健康体检及生活方式问卷问诊发现慢性疾病的危险因素,评估受检者患慢性病的风险,给予个性化生活方式干预,通过定期随访不
研究背景Bardet-Biedl 综合征（Bardet-Biedl syndrome,BBS）是一种常染色体隐性遗传性纤毛病,影响多器官系统,尚无有效的治疗措施,致残率和病死率高。BBS罕见,且具有高度临床和遗传异质性,早期及产前诊断困难。基因诊断技术的发展为BBS产前诊断提供了可能,但目前对BBS宫内表型的认识有限,在没有家族史的情况下,产前基因诊断罕见。因此,探索BBS的宫内表型、致病基因及变
研究目的金纳米颗粒（Gold nanoparticles,AuNPs）作为一种优良的功能材料,具有尺寸可控、易于合成、易表面修饰、理化性质稳定、安全无毒的优点,已被广泛研究应用于生物医学科学领域,为医学成像诊断提供新的技术方法。肾纤维化是大多数慢性肾脏疾病中组织重塑的共同途径。目前,活组织检查是唯一可用于诊断和分期肾纤维化的方法,但有一定的局限性,亟需开展一种无创快捷并且允许纵向分段监测肾纤维化进
研究背景:随着骨免疫学说的发展,免疫细胞对骨缺损修复的积极作用引起学术界的广泛关注,摒弃以往追求“惰性”生物材料的理念,更多的学者致力于研发一种具骨免疫调节性能的生物材料,即通过改变免疫细胞行为而营造利于骨再生的免疫微环境,最终达到生物材料促进骨再生修复的目的。巨噬细胞作为生物材料介导机体反应的主要参与者,其促炎M1分型与抑炎M2分型的转换调控着骨髓间充质干细胞成骨分化及成骨/破骨稳态平衡。生物材