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点击反应作为一种高选择性和高反应效率的方法,在化学和生物学领域得到非常广泛地应用。目前,单一点击反应已广泛应用于细胞成像,但是利用多个正交反应对同一生物体系进行多重标记仍然是一个挑战。本研究将两种不同机理的点击反应—一种是tetrazine-alkene[4+2] Diels-Atder cycloaddition,(四嗪-烯烃[4+2]狄尔斯—阿尔德环加成反应),另外一种是CBT-Cys condensation reaction(2-氰基苯并噻唑-半胱氨酸缩合反应)——结合起来,验证其正交性,并将其运用于常见的HepG2细胞的细胞器成像中,实现了同时显示细胞线粒体和细胞膜的状态。实验结果说明在同一细胞中同时运用两个(或者多个)点击反应标记多个细胞器是可行的。