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【背景与目的】NPM1(Nucleophosmin,又称B23、Numatrin或N038)是一种主要的核仁磷酸化蛋白,与P53、P19ARF及P14ARF相互作用保持基因组的稳定性,可以起到重要的肿瘤抑制作用。2005年至今多篇文献报道了急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者尤其是正常核型AML患者中NPM1基因第12外显子突变的发生率较高,成为目前AML患者中最常见的一种分子遗传学异常;且发生NPM1基因突变的AML患者具有相对特异的临床特征,对于了解AML患者的发病机制有一定帮助。鉴于现阶段在国内尚无大样本病例的相关研究,我们收集了大量成人AML患者的初诊骨髓/外周血标本,从以下三方面进行研究:(1)检测NPM1基因第12外显子的突变在156例成人AML患者中的发生率;(2)分析NPM1基因突变阳性AML患者的临床资料探讨其临床特征及预后;(3)对其中同时检测了NPM1和FLT3两种基因突变情况的86例AML患者进行综合分析,了解这两种基因突变发生的关系及对预后的影响。【方法】156例成人AML患者来自2005年1月～2006年4月我单位住院或门诊初诊病例,其中男性84例、女性72例;中位年龄48(15～73)岁。按FAB分型标准,M0 1例﹑M1 27例、M2 46例﹑M3 29例﹑M4 9例﹑M5 39例﹑M6 5例,其中正常核型AML 90例,异常核型AML 66例。主要研究方法为:(1)用基因组DNA-聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增NPM1基因第12号外显子,通过对PCR扩增产物进行毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)的方法筛选出NPM1基因突变阳性的AML患者。对于突变的AML患者,将PCR产物回收纯化后用pMD18-T载体做克隆测序,明确NPM1基因突变发生的位置和类型;(2)分析156例AML患者的临床及实验室资料了解NPM1基因突变阳性患者的临床特征;(3)随访上述病例中住院患者对治疗的反应以及生存时间,了解预后;(4)采用基因组DNA-PCR法检测其中86例AML患者的FLT3内部串联重复(internal tandem duplication, ITD)突变发生情况,综合分析其临床资料了解两种基因突变发生的关系及对预后的影响。【结果】156例成人AML患者中共检出44例发生了NPM1基因第12号外显子的突变,检出率为28.2%;其中M0为1/1例(100%)、M1为11/27例(40.7%)﹑M2为11/46例(23.9%)﹑M3为0/29例(0%)、M4为2/9例(22.2%)﹑M5为18/39例(46.2%)﹑M6为1/5例(20.0%)。90例正常核型AML中检出37例突变阳性患者(41.1%),66例异常核型AML中检出7例突变阳性患者(10.6%),正常核型AML患者NPM1基因突变的比例高于异常核型组(P<0.001)。NPM1基因突变阳性患者年龄相对较大(P<0.05),外周血白细胞高(P<0.05),伴有CD34和CD117低表达(P值均<0.05)。对其中32例突变标本的PCR产物进行克隆测序,结果发现了5种已知的NPM1基因突变类型,即TCTG插入重复25例(25/32;78.1%)、CATG插入2例(2/32;6.3%)、CCTG插入2例(2/32;6.3%)、CCAG插入1例(1/32;3.1%)和CTTG插入1例(1/32;3.1%)(分别为A、B、D、NM和PM突变类型),并新发现了一种NPM1突变类型(CAAA插入1例,暂将其命名为S型)。突变发生的位置均在960～961位核苷酸(正常参照序列genebank编号为NM-002500),且均为杂合型突变。NPM1基因突变是一种移码突变,形式多样,但形成的突变NPM1蛋白C末端氨基酸序列均为VSLRK。与NPM1-AML患者组相比,NPM1+AML患者组临床完全缓解(complete remission, CR)率偏高(66.7% vs 54.8%),总的生存时间偏长,但均无统计学意义(P>0.05)。NPM1+AML患者组FLT3-ITD的检出率为24.1%,是NPM1-AML患者组FLT3-ITD检出率(14.1%)的1.72倍。NPM1+/FLT3-ITD-、NPM1-/FLT3-ITD-、NPM1+/FLT3-ITD+、NPM1-/FLT3-ITD+组患者在86例AML患者中的检出率分别为25.6%、56.9%、8.1%、9.3%;四组的CR率分别为66.7%、60.0%、50.0%、42.9%(P>0.05);且在总生存时间上也无差异。【结论】成人AML患者中NPM1基因第12号外显子的突变类型多样,一般为4 bp插入的杂合型突变,并在国内外首次报道了一种新的NPM1基因突变类型(即CAAA插入)。NPM1基因第12号外显子的突变多见于正常核型AML,FAB-M1和M5患者更为多见,突变组患者年龄较大,外周血白细胞数量高,并与CD34和CD117表达低水平相关。NPM1与FLT3基因突变相伴发生的几率高,携带有NPM1基因突变而无FLT3-ITD突变的AML患者在临床上CR率偏高,长期生存率高,可能是预后良好的指标。本实验检测NPM1基因突变所用的基因组DNA-PCR方法简单可靠,容易在各单位开展,可以用于初诊AML患者的辅助诊断,对于提示其临床预后可能有一定的帮助。