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MADS-box家族基因是一类编码转录因子的基因,在植物生长发育过程中起重要的作用。如在植物根的营养吸收、春化、开花时间、分生组织分化、胚的发育及果实成熟等方面起着作用。近年来已发现MADS-box基因在植物花色素苷合成、抗逆性、根结构、芽的休眠、甚至叶片的发育方面都发挥着重要作用。本论文克隆黄瓜的Cs MADSs(Cs MADS08、Cs MADS21)基因,研究其在烟草细胞中的定位情况,构建过表达载体,农杆菌介导转化拟南芥,分子检测及筛选获得转基因植株,对转基因后代进行GUS染色及表型变化分析,同时检测Cs MADSs基因在转基因植株中的表达情况,结果如下:1、p CAMBIA1305-Cs MADSs过表达载体的构建。Bam H I-Sal I双酶切p MD19-T-Cs MADSs质粒,Sal I-Bgl II双酶切p CAMBIA1305植物表达载体。T4连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,经PCR检测和测序验证获得重组质粒p CAMBIA1305-Cs MADSs。2、Cs MADSs的亚细胞定位。重组质粒pCAMBIA1305-Cs MADSs冻融法转化农杆菌,取2ml处理液注射烟草幼嫩叶片,注射后36-48h,荧光共聚焦显微镜观察Cs MADS08、Cs MADS21在烟草中的瞬时表达情况,结果表明,Cs MADS08定位于细胞膜和细胞核上,而Cs MADS21定位于细胞膜上。3、转基因后代表型变化分析。采用花序浸染法将过表达载体的农杆菌菌液转化拟南芥,潮霉素筛选和PCR验证获得阳性植株,观察转基因后代植株各器官的生长发育情况。结果表明,过表达植株均出现叶片发紫现象;过表达Cs MADS08植株,株型较矮,莲座叶侧枝减少,且出现大量的茎生叶,果荚数减少;在T4代出现了表型分离,一部分出现前面的表型,另一部分植株分枝数增加,果荚数多。而过表达Cs MADS21植株,莲座叶侧枝及茎生叶侧枝都增加,花期提前一周,果荚数多且饱满,成熟期提早。4、过表达植株的GUS染色。对过表达Cs MADS08及Cs MADS21植株各器官进行GUS染色,结果表明,过表达Cs MADS08植株的根被染色,而过表达Cs MADS21植株的根、茎、花、叶、果荚均被染色。5、过表达植株的花青素含量变化。提取过表达植株及野生型植株叶片的花青素,结果显示过表达植株叶片的花青素含量都比野生型高,达到显著差异。6、实时荧光定量检测目的基因的表达量。提取T3代植株各器官总RNA,实时荧光定量PCR检测Cs MADSs基因的表达情况,结果显示,过表达Cs MADS08植株在茎中表达量高,而过表达Cs MADS21植株在花中高表达。综上所述,本论文研究过表达黄瓜Cs MADSs基因的拟南芥植株在转基因后代的表型变化及表达分析,该研究为进一步探讨黄瓜Cs MADSs基因的功能提供了理论依据。