论文部分内容阅读
愈伤组织以其繁殖速度快、易于保存等优点被认为是果树种质资源离体保存的一种方式,然而愈伤组织在组织培养中会存在许多遗传变异。转座子的转座激活也被证实是导致遗传变异的分子机制之一,近几年的研究发现转座子还参与到了基因组进化、基因表达调控、逆境响应等过程。研究果树转座子激活有助于为降低种质保存的遗传变异提供分子基础,有助于为创新种质资源提供新方法,有助于为理解果树芽变提供新思路。本课题检测了长期保存后的柑橘愈伤的体细胞胚胎发生能力,利用Transposon Display(TD)、Southern杂交、定量PCR等方法检测了长期保存的柑橘愈伤中转座子的转座活性,同时探索了诱导转座子转座激活的因素,主要实验结果如下:1.长期继代保存的伏令夏橙愈伤组织依然保留着体细胞胚胎发生能力,本研究所用的9个长期继代的该品种愈伤系材料中6个具有胚胎发生能力,经流失细胞仪鉴定,胚状体能保持原来的倍性。然而,6个愈伤系材料的胚状体中仅有1个愈伤系能够生芽。因此长期继代保存会对柑橘愈伤的体细胞胚胎发生能力产生影响。2.TD实验结果表明:在长期保存柑橘愈伤中,Csgypsy1、Csgypsy2、Cscopia3、CsMuDR1、Cs MITE1、Cs Tcs1、Cscopia1、CshAT1有单套染色体转座子拷贝数的变化。其中Csgypsy1和Csgypsy2在愈伤中其单套染色体转座子拷贝数随着愈伤倍性增加而增加,这一结论也在Cscopia3的Southern杂交结果中得到证实。同时,通过DNA甲基化敏感内切酶的Southern杂交实验结果也说明了转座子区域确实存在一定程度的DNA甲基化。3.定量PCR实验结果表明,Csgypsy2、Cscopia3、CsMuDR1、Cs MITE1的转录水平都比较低,而Csgypsy1却有较高的转录水平,说明不同转座子类型转录活性差别较大。低温逆境会导致转座子CsGypsy1、Cscopia3在部分柑橘愈伤系中的转录水平升高,TD实验也证明Cscopia3的拷贝数随着冷处理的时间延长而增加。说明低温逆境是引起转座子转座激活的因素之一。