目的：　　扩增鼠抗人IL-37单克隆抗体全长序列，通过基因测序鉴定抗体全长序列，并运用生物信息学方法进行同源性比对，分析单抗的超变区基因序列和氨基酸序列。诱导表达具有生物学活性的可溶性重组人IL-37蛋白，经亲和层析法纯化，将其作为抗原免疫家兔，制备兔抗人IL-37多克隆抗体，纯化抗体后用此多抗联合单抗建立双抗夹心ELISA方法，检测人血清中IL-37的表达水平。　　方法：　　1.鼠抗人IL-37单克隆抗体序列扩增和分析　　TRIZOL法提取分泌IL-37单克隆抗体的细胞株总RNA，使用oligo(dT)为引物逆转录合成cDNA，然后使用特异性针对鼠IgG1重链和kappa轻链引物进行PCR扩增，得到抗体重链和轻链全长基因序列。凝胶回收，连接 T载体后转入E.coli DH5α感受态细胞内，通过蓝白斑筛选体系，得到阳性克隆株，挑取阳性菌落扩大培养，提取质粒 PCR进行初步鉴定，最终通过基因测序鉴定扩增片段的基因序列，并通过Ig BLAST软件分析抗体重链和轻链的超变区基因序列和氨基酸序列。　　2.兔抗人IL-37多克隆抗体的制备及鉴定　　利用IPTG诱导含质粒pET28a/ IL-37的大肠埃希菌菌株表达重组IL-37蛋白，对菌体裂解上清液进行Ni2+-NTA凝胶层析纯化，获得纯化的IL-37蛋白，并以该蛋白为免疫原，免疫新西兰家兔（月龄3个月，雌性，体重1.5kg），制备免疫血清，以硫酸铵盐析法初步纯化多抗。同时用间接 ELISA法检测抗体效价，BCA法测抗体浓度，免疫印迹法（Western Blot，WB）鉴定抗体特异性。取未免疫之前少量兔血清作为阴性对照。　　3.检测人IL-37双抗夹心ELISA方法的建立　　以鼠抗人IL-37单抗作为捕获抗体，兔抗人IL-37多抗作为检测抗体，HRP标记山羊抗兔IgG为二抗，重组人IL-37蛋白为标准品，建立检测人IL-37的双抗夹心 ELISA法。并对该方法的工作条件进行优化，测定本方法的重复性，稳定性和线性范围，并初步用于检测登革热病人和正常人血清中IL-37的含量。　　结果：　　1.鼠抗人IL-37单克隆抗体序列扩增和分析　　通过RT-PCR方法扩增抗体全长基因，获得了IL-37单克隆抗体重链和轻链的扩增产物，并且经质粒 PCR和基因测序证实扩增产物序列正确，重链全长大小为1306bp，轻链全长大小为631bp。进一步通过生物信息学方法分析得出抗体超变区基因序列和氨基酸序列。　　2.兔抗人IL-37多克隆抗体的制备及鉴定　　将浓度为1.4mg/ml的纯化后IL-37蛋白免疫2只家兔制备的抗血清效价分别为1:128,000，1:32,000。荧光显微镜下显示该多抗可与IL-37转染的细胞中目的蛋白结合。Western blot结果也显示多抗与真核表达IL-37蛋白结合，证明制备的多抗特异性较高，可以同时结合原核和真核表达蛋白。　　3.检测人IL-37双抗夹心ELISA方法的建立　　成功建立了检测人 IL-37的 ELISA方法。该方法中包被的捕获抗体稀释度1:200，检测抗体稀释度为1:6000，最适酶标二抗稀释度为1:5000，最适封闭液为50g/L的脱脂奶粉，重组 IL-37蛋白做为标准品时最佳线性范围为(1.465~46.875)μg/L，检测灵敏度为1.465μg/L，批内和批间变异系数分别为6.6%和11.7%。　　结论：　　1.成功扩增鼠抗人IL-37单克隆抗体全长序列，并分析得到了超变区基因序列和氨基酸序列。　　2.成功建立单抗-多抗配对的夹心ELISA检测方法，并将该方法初步运用到登革热患者外周血中IL-37的检测。