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目的：
通过建立小鼠急性移植物抗宿主病(Acute graft versus host disease，aGVHD)模型，采用流式细胞术、实时定量PCR、ELISA、病理学等方法，研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histione deacety1ase inhibitor，HDACI）对小鼠GVHD的影响及免疫调节作用，探讨HADCI减轻GVHD的分子生物学机制。
方法：
1、选择BALB/C(H-2d)雌性小鼠为受鼠，C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供鼠；直线加速器总剂量6.0Gy全身照射(TBI)受鼠后，尾静脉联合输注供鼠的新鲜脾脏单个核细胞(1.8×106)、骨髓单个核细胞(1.6×106)悬液建立小鼠aGVHD模型。移植后小鼠随机分为两组：SAHA治疗组：腹腔注射SAHA35g/kg/次，d3，5，7，9，11; DMSO对照组：腹腔注射DMSO剂量350μ1/kg/次，d3，5，7，9，11。
2、观察SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠aGVHD的发生率、临床表现及生存时间；移植后+2d、+4d、+7d行小鼠外周血白细胞计数检测造血重建，+15天PCR扩增外周血基因组Y染色体检测骨髓植入是否成功；取濒死或实验终点小鼠的肝、脾、小肠组织，行病理学检测。
3、流式细胞术每周检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞的百分含量；以β-actin为内参照，实时定量PT-PCR检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠Foxp3mRNA的相对表达量，采用溶解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性。
4、ELISA试剂盒检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠外周血细胞因子白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）及转化生长因子-β1(Transforming growthfactorβ1，TGF-β1)。
5、统计学处理：数据统计分析采用SPSS13.0统计软件包进行处理，实验所得数据以均数士标准差（x±SD）表示，多组间比较采用One-way ANOVA统计方法分析，移植后外周血林白细胞亚群变化采用重复测量统计分析，组间比较采用LSD或Dunnett’T3多重比较法。采用析因方差分析对SAHA治疗组与DMOS对照组的Foxp3基因表达变化差异进行统计分析。一个因变量与多个自变量间的线性数量关系用linear regression进行逐步回归统计分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。
结果：
1、经TBI的BALB/C(H-2d)受鼠，尾静脉联合输注C57BL/6(H-2b)供鼠的新鲜脾脏、骨髓单个核细胞悬液后，移植后+7dWBC均大于1.0×109/L，提示造血重建；SAHA治疗组与DMSO对照组在不同时间段均出现aGVHD;移植后+15dSAHA治疗组与DMSO对照组外周血PCR产物中均能检测到供鼠Y染色体，提示供鼠骨髓细胞在受体内植入成功。
2、SAHA治疗组较对照组小鼠出现aGVHD时间推迟，程度减轻、生存时间延长。SAHA治疗组生存率与DMSO对照组相比，差异具有显著性(P＜0.05)：SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠aGVHD发生率为100％。aGVHD评分显示：SAHA治疗组与DMSO对照组各周aGVHD评分相比，移植后第一周SAHA治疗组与DMSO对照组差异无显著性(P＞0.05)，移植后第二周、第三周、第四周SAHA治疗组aGVHD评分均低于DMSO对照组，差异具有显著性(P＜0.05)。SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠GVHD发生时的病理改变基本一致，DMSO对照组病变较为严重。提示SAHA能有效减轻GVHD的临床表现及严重程度。
3、SAHA治疗组小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞阳性百分率移植后随时间呈逐渐递增趋势；DMSO对照组小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞阳性百分率随时间呈逐渐递减趋势。移植后+7dSAHA治疗组小鼠CD4+CD25+Foxp3+细胞比例与DMSO对照组差异无显著性(P＞0.05)；移植后+14d、+21dSAHA治疗组CD4+CD25+Foxp3+细胞比例均高于DMSO对照组，差异具有显著性(P＜0.05)。移植后+12d行RT-PCR检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠外周血Foxp3mRNA表达水平示SAHA治疗组Foxp3mRNA相对表达水平较DMSO对照组明显升高，差异具有显著性(P＜0.01)。
4、移植后+12d，SAHA治疗组IL-2水平显著低于DMSO对照组水平，差异具有显著性(P＜0.01);SAHA治疗组TGF-β水平显著高于DMSO对照组，差异具有显著性(P＜0.01)。
结论：
1．MHC不相合的C57BL/6(H-2b)、BALB/C(H-2d)小鼠分别为供、受鼠，受鼠经6.0Gy全身照射后，输注异基因供鼠脾脏、骨髓单个核细胞，可以诱导出MHC不相合的造血干细胞移植后aGVHD小鼠模型；
2．SAHA可延迟aGVHD的发生，减轻aGVHD的严重程度;
3．SAHA可提高移植后小鼠外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例，抑制了前炎症因子的瀑布效应，增强了免疫抑制效应，减轻各器官脏器的免疫攻击效应，从而在一定程度上改善了GVHD的临床症状和致死率；
4．SAHA可降低移植后小鼠IL-2的水平，提升TGF-β的水平;
5．SAHA减轻aGVHD，可能是通过提升CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例，提高TGF-β的水平，降低IL-2的水平实现的。