微生物转化菊糖产果糖的研究

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菊粉是一种贮藏性多糖,是近年来科学家重点研究的糖类之一。菊粉主要存在于菊科植物中,尤其在菊芋中含量最高。菊粉可以被菊粉酶水解成果糖或低聚果糖。菊芋具有极强的耐寒能力,对土壤的要求不高,而且繁殖力强,根系发达,只需要播种一次就可以多年生长。同时,菊芋也可以降低土壤中盐碱含量,这些都对改善土壤有极大的作用,菊芋也具有很高的食用和药用价值以及应用前景。菊粉酶是一种水解酶,能够在一定条件下水解菊粉而生成果糖或者低聚果糖。菊粉酶在自然界中的分布很广,很多动植物消化道中的微生物都可以分泌菊粉酶。根据菊粉酶酶切果聚糖链的方式不同,把菊粉酶分为菊粉外切酶(Exoinulinase,EC 3.2.1.80)和菊粉内切酶(Endoinulinase,EC 3.2.1.7),其中菊粉外切酶能水解产生果糖,它作用于菊粉链的非还原性末端的糖苷键,并且它在微生物的胞内、胞壁和胞外都有分布,这三种不同位置的酶的比例会受到菌种、碳源、温度和pH等的影响而改变;内切酶随机地作用于菊粉链内部的糖苷键,水解产物主要为高纯度低聚果糖。本论文对实验室一株未知菌种PX的产酶情况进行了研究。首先对该菌种进行了纯化和鉴定,经16S rDNA测序后,鉴定该菌种为假单胞菌属,通过革兰氏染色试验,在显微镜下观察到:菌体呈红色,即该菌为革兰氏阴性菌,菌落呈边缘光滑整齐的圆形,乳白色而且有一定的粘性。同时我们又对这株菌的产酶情况进行了研究。首先对酶进行了定位,结果该菌所产酶为菊粉外切酶,这种酶同时存在于细胞内和细胞壁,之后对产酶条件进行优化,得出其最适发酵条件为:1.5%菊糖,0.4%酵母浸粉,1%的磷酸氢二钾,培养温度为30℃。最后对粗酶液的酶学性质进行了初步研究,研究表明:粗酶液最适作用pH为4.5,最适作用温度为55℃。
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