利用细菌表面展示技术构建镉耐受性的重组根瘤菌

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laverke
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本文以具有表面展示功能的野油菜黄单胞菌( Xanthomonas campestris) ACCC10049冰晶核蛋白N端(inaXN)为运载蛋白,将猴金属硫蛋白α结构域四聚体(MT4α)展示在费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01菌株的细胞表面;在此基础上,在培养条件下测定比较测定了重组菌和出发菌对镉的耐受性及吸附能力,通过盆栽实验考察了重组菌与豆科植物共生时共生体系对镉的富集和共生表型。  将 PCR扩增得到的金属硫蛋白及金属硫蛋白表面展示基因分别与广宿主载体pBBR1MCS5、pTPG-PnifH分别构建组成型金属硫蛋白表达载体(pBLM)、组成型金属硫蛋白表面展示载体(pBLIM)、诱导型金属硫蛋白表达载体(pTNM)及诱导型金属硫蛋白表面展示载体(pTNIM),并通过三亲本杂交,将四个表达载体接合转移至HN01中筛选获得四种重组菌。  在培养条件下,我们测定了重组菌和出发菌对镉的吸附能力及耐受性,结果表明:组成型表达重组菌HN01(pBLIM)、HN01(pBLM)在上述两个方面的能力均强于出发菌HN01。其中HN01(pBLIM)对镉的吸附富集能力提高了2倍,其镉吸附能力也强于HN01(pBLM)。本研究还发现重组根瘤菌具有很好的静态吸附效果。  盆栽实验结果表明:接种重组菌HN01(pBLIM)、HN01(pBLM)、HN01(pT NIM)、HN01(pTNM)和HN01的共生体系与镉的相互作用结果各有不同。在镉胁迫条件下,重组菌和出发菌与大豆共生体系对植物生长均起到了一定的保护作用,但对镉的富集能力则有所不同。其中在Cd2+浓度为9μmol/L的盆栽实验显示,接种诱导表达型重组菌 HN01(pTNIM)的大豆根瘤中,其 Cd2+富集含量最大为出发菌的1.85倍。
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