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目的：构建可靶向性识别HBV增强子的锌指蛋白（zinc fingerprotein，ZFP）人工转录因子（Artificial Transcription Factor，ATF）真核表达载体，检测其在真核细胞内的表达、对细胞增殖影响及生物学活性分析，通过靶向性识别HBV增强子来抑制HBV DNA复制与表达作用，为探索防治HBV感染的方法提供实验依据。方法：(1) ATF真核表达质粒载体pcDNA3.1-ATF的设计与构建。（2）将pcDNA3.1-ATF转染HepG2细胞，采用RT-PCR、免疫荧光及Western-blot检测ATF mRNA与蛋白的表达；采用CCK-8检测不同浓度的ATF对细胞增殖的影响；应用荧光素酶报告基因系统检测ATF对HBV增强子靶序列的抑制作用。（3）通过pcDNA3.1-ATF转染HepG2.2.15细胞，采用免疫荧光检测ATF在细胞内的表达，同时评价ATF对细胞生长的影响，分别利用荧光定量、Western-blot、RT-PCR方法检测对HBV DNA复制与表达的抑制作用。结果：（1）成功构建pcDNA3.1-ATF真核表达质粒载体。（2）ATF在HepG2细胞中能够正常表达且对细胞增殖生长无明显的毒性作用；双荧光素酶报告基因系统分析ATF能靶向性结合HBV增强子序列，具有抑制报告基因的表达的作用。（3）转染pcDNA3.1-ATF表达质粒于HepG2.2.15细胞，成功验证ATF具有抑制HepG2.2.15细胞内HBVDNA复制与表达的作用，在转染72h后抑制作用达最高。实验结果提示ATF可特异性结合HBV EnhI靶核苷酸序列并表现出相应的生物学活性。结论：通过基因工程的方法设计与构建靶向HBV EnhI核酸序列的真核表达质粒载体pcDNA3.1-ATF，其在细胞内能够正常表达，且对细胞生长无明显细胞毒性作用，并具有结合HBV EnhI靶序列，抑制HBVDNA复制与表达的生物学作用。