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目的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是妇科最常见的内分泌疾病之一,目前其确切病因仍不清楚。PCOS患者卵泡发育成熟障碍会导致其不孕,卵巢颗粒细胞对卵泡发育至关重要。微小RNAs(mircroRNAs,miRNAs)是一类大小约为20～24个核苷酸的单链非编码RNA,能与靶基因的3’UTR结合,负向调控其表达。研究表明miRNAs参与卵巢颗粒细胞功能的调控。本课题组前期研究利用来曲唑联合高脂饮食喂养的方式成功建立了PCOS大鼠模型,并对PCOS模型组大鼠和对照组大鼠卵巢组织进行miRNAs测序,结果发现miR-509-3p在PCOS模型大鼠卵巢组织中表达显著性上调。本研究旨在探究miR-509-3p对颗粒细胞功能的影响,揭示miR-509-3p在PCOS发病中的作用及可能的作用机制,为探索PCOS的发病机制和治疗靶点提供理论依据。方法(1)用TargetScan数据库预测miR-509-3p的靶基因。(2)用qRT-PCR和Western blot检测PCOS模型大鼠和正常对照组大鼠卵巢组织中miR-509-3p和靶基因IGF2BP2的表达情况。在KGN细胞中转染mi R-509-3p mimics和inhibitors,利用qRT-PCR和Western blot检测IGF2BP2表达变化情况。用双荧光素酶报告基因实验确认miR-509-3p和IGF2BP2 3’UTR结合情况。(3)在KGN细胞中转染miR-509-3p mimics、miR-509-3p inhibitors和IGF2BP2的siRNA,利用CCK8检测细胞增殖情况,利用流式细胞技术检测细胞凋亡情况。(4)在KGN细胞中转染miR-509-3p mimics和inhibitors,利用Dot blot检测KGN细胞mRNA m~6A水平变化情况。结果(1)TargetScan数据库预测IGF2BP2是miR-509-3p的一个靶基因。(2)qRT-PCR和Western blot结果显示:与对照组相比,在PCOS大鼠卵巢组织中,miR-509-3p表达上调(P<0.01),IGF2BP2表达下调(P<0.05)。在KGN细胞中,miR-509-3p可以负向调控IGF2BP2的表达(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-509-3p可与IGF2BP2的3’UTR靶向结合(P<0.05)。(3)CCK8和流式细胞技术结果显示:miR-509-3p mimics可以抑制KGN细胞增殖(P<0.05),并促进细胞凋亡(P<0.01),而miR-509-3p inhibitors作用相反(P<0.05),IGF2BP2 siRNA可以抑制KGN细胞增殖(P<0.01),并促进细胞凋亡(P<0.01)。(4)Dot blot结果显示:miR-509-3p mimics下调了KGN细胞mRNA m~6A水平(P<0.01),而miR-509-3p inhibitors则上调了KGN细胞mRNA m~6A水平(P<0.01)。结论miR-509-3p在PCOS大鼠卵巢组织中表达上调,miR-509-3p可能通过靶向IGF2BP2下调细胞mRNA m~6A水平,进而抑制颗粒细胞增殖,促进颗粒细胞凋亡,参与PCOS发生发展。