耐低磷苎麻筛选及多年生植物成熟叶片蛋白提取方法改良

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Nibel
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苎麻(Boehmeria L.Gaud)作为重要的纤维作物、饲料作物、工业原料,在我国纺织业、畜牧业和工业上拥有举足轻重的地位。随着种植业结构调整,苎麻种植区域向山坡地、贫瘠地转移,苎麻抗逆性、耐逆性生理机制探索成为新的研究热点,筛选耐低磷胁迫材料是研究苎麻耐贫瘠生理机制的基础。本文以138份苎麻品种为供试材料,通过测定与耐低磷胁迫相关生理指标,初步筛选出19个耐低磷差异基因型苎麻品种,对该19个苎麻品种进行砂培低磷胁迫,通过测定农艺性状鉴定其耐低磷性。并基于SSR技术用39对与低磷胁迫相关的引物,对该19个苎麻品种进行遗传多样性分析。磷素作为很多化合物的重要组成成分,在植物生长进程中属于可移动元素,易从成熟叶片转运至新生叶,而成熟叶片差异蛋白质组学研究鲜有报道,为未来研究磷胁迫相关差异蛋白质组学提供技术支持,本文对6种常见的多年生物种成熟叶片蛋白质提取方法进行了改良。研究结果如下:1、测定138份苎麻品种旺长期成熟叶片相对电导率、丙二醛含量、酸性磷酸酶活性、全磷含量等指标,SPSS 19.0软件均值聚类分析结果表明,138份苎麻品种可聚为19个类群,每类群包含的品种个数分别为16、24、1、19、3、9、17、2、2、1、2、2、1、18、10、6、2、2、1,每类群中选取的代表品种分别为“垫江白麻”、“旺苍乌脚麻”、“大黄麻”、“小叶绿”、“黄皮棍”、“蒲圻大叶麻”、“细叶绿”、“大叶绿”、“洪湖青麻”、“鹤峰苎麻”、“华苎5号”、“新余麻”、“湘苎1号”、“资兴麻”、“牛耳青”、“巴西8号”、“巴西3号”、“巴西2号”、“黄荆皮”。2、测定19个苎麻品种低磷胁迫下株高、绿叶数、绿叶面积、叶绿素相对含量、根鲜重、生物量鲜重、根冠比等各相对耐性指数,SPSS 19.0软件均值聚类分析结果表明,19个苎麻品种可聚为3类,其中,“旺苍乌脚麻”、“垫江白麻”、“华苎5号”、“黄皮棍”、“小叶绿”、“蒲圻大叶麻”、“巴西2号”为耐低磷基因型品种;“巴西8号”、“巴西3号”、“洪湖青麻”、“鹤峰苎麻”、“黄荆皮”、“牛耳青”、“大黄麻”为中耐低磷基因型品种;“大叶绿”、“资兴麻”、“细叶绿”、“新余麻”、“湘苎1号”为不耐低磷基因型品种。3、39对低磷胁迫相关SSR引物对该19个苎麻品种进行遗传多样性分析表明,19个品种可聚为4类,其中“大叶绿”单独为支,与其他品种亲缘关系较远,“华苎5号”、“洪湖青麻”、“鹤峰苎麻”、“细叶绿”、“蒲圻大叶麻”聚为一支,其中“华苎5号”和“洪湖青麻”之间的亲缘关系很近,“巴西8号”、“巴西3号”、“巴西2号”、“湘苎1号”、“资兴麻”、“新余麻”、“黄荆皮”、“旺苍乌脚麻”、“牛耳青”聚为一支,其中“巴西8号”和“巴西3号”之间的亲缘关系很近,“小叶绿”、“黄皮棍”、“大黄麻”、“垫江白麻”聚为一支,其中“小叶绿”和“黄皮棍”之间的亲缘关系很近。4、基于常规幼嫩叶片蛋白质提取方法,本文对6种常见的多年生物种成熟叶片蛋白质提取方法进行了改良,裂解液里用Tris和Triton-100替代CHAPS,增加20%TCA水溶液和100%丙酮液两个步骤清洗去杂,结果表明改良后的蛋白质提取方法使双向电泳图谱更加清晰,可鉴定到的蛋白点数量增多,拖尾现象明显减少,但酸溶性蛋白数量减少。
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