抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤及IgM、gp96蛋白表达的影响

来源 :泸州医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yingzizhang
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目的:尽管鼻咽癌的诊断和治疗方法都在不断进步,但对其早期诊断与预后判断还缺乏有效的手段,患者的5年生存率还有待进一步提高;因而我们需要在鼻咽癌发病机制理论研究领域取得突破性进展,寻找新的靶点,以提高其早期诊断水平和整体治疗效果。本实验通过研究抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长、肿瘤细胞凋亡以及免疫球蛋白M(IgM)、糖蛋白gp96 (Glycoprotein96, gp96)表达的影响,以期探讨IgM在鼻咽癌中异位表达的生物学活性以及抗人IgM抗体影响裸鼠成瘤的可能机制。方法:对鼻咽癌HNE-1细胞进行传代培养,制成细胞悬液,接种于Balb/c-nu/nu裸鼠右侧背腹部皮下,建立鼻咽癌移植瘤模型;15只荷瘤裸鼠随机分为实验组(腹腔注射抗人IgM抗体,1.5mg/裸鼠,分5次,每隔3天1次)、IgG对照组(腹腔注射IgG抗体)及PBS对照组(腹腔注射PBS),同时观察裸鼠移植瘤生长情况,定期(每四天)称量裸鼠体重并以游标卡尺测量移植瘤的长径及短径,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积=肿瘤长径×肿瘤短径2/2。5次腹腔给药后观察1周,处死裸鼠,取瘤体,称量移植瘤重量,计算抑瘤率。常规HE染色观察移植瘤光镜下改变,并取裸鼠主要内脏行HE染色。采用TUNEL技术检测鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡情况,采用图像分析系统计算凋亡指数;同时利用免疫组化SP法检测裸鼠移植瘤组织中IgM、gp96蛋白的表达情况,同样采用图像分析系统作平均光密度值测定。结果:(1)成功构建出人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,三组裸鼠均有鼻咽癌原位移植瘤生长,成瘤率100%;其瘤组织经病理切片检查证实为鼻咽癌,且在实验期内,三组动物全部存活。(2)三组裸鼠饮食正常,活动自如,精神状态良好,无1只死亡;其心、肝、脾、肺、肾组织形态观察无明显差异。(3)抗人IgM抗体干预组裸鼠移植瘤体积为(26.73±16.51)mm3,较IgG对照组(204.97±151.88)mm3和PBS对照组(230.16±167.78)mm3明显减小,三组间差异有统计学意义(P<0.05);抗人IgM抗体干预组裸鼠体重为(21.10±2.35)g,而IgG对照组为(20.70±3.29)g, PBS对照组(20.01±2.22)g,三组间差异无统计学意义(P>0.05);抗人IgM抗体干预组裸鼠移植瘤重量(0.09±0.07)g,较IgG对照组(0.35±0.10)g和PBS对照组(0.38±0.08)g明显减小,经统计学分析差异有统计学意义(P<0.05);同时计算抑瘤率分别为74.45%和76.84%。(4)TUNEL法检测鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡水平,抗人IgM抗体干预组肿瘤细胞平均凋亡指数为(1.50±0.76)%,较IgG对照组(0.49±0.15)%和PBS对照组(0.42±0.20)%明显升高,三组间差异经统计学分析有统计学意义(P<0.05);(5)免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织中IgM、gp96蛋白表达,抗人IgM抗体干预组IgM蛋白表达的平均光密度值为(0.01±0.01),与IgG对照组(0.06±0.03)和PBS对照组(0.05±0.03)相比均显著下降,三组间差异有统计学意义(P<0.05);抗人IgM抗体干预组gp96蛋白表达显著下降(0.05±0.01),经统计学分析与IgG对照组(0.10±0.03)和PBS对照组(0.11±0.02)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)抗人IgM抗体能显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长,提示鼻咽癌异位表达的IgM具有生长因子样作用。(2)抗人IgM抗体能显著抑制IgM蛋白表达,通过阻断其生物学活性来抑制肿瘤生长。(3)抗人IgM抗体可抑制gp96蛋白表达,推测其机制可能与抑制IgM表达有关。(4)抗人IgM抗体能促进裸鼠移植瘤中鼻咽癌HNE-1细胞凋亡,其机制可能与抑制IgM、gp96蛋白表达有关。
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