黄瓜中GA信号转导因子CsGAIP和CsGAMYB1的克隆与功能分析

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黄瓜(Cucumis Sativus L.)属单性花植物,花的性别分化直接影响着增产潜力。前人已就黄瓜雌花发育的调控机制开展了较多研究,而雄花发育分子机制则一直被忽视,尚难全面了解黄瓜花芽性别发育的分子机制。赤霉素(GA)是重要的植物激素之一,可促进黄瓜雄花形成,但其作用机制尚不清楚。本文以雌雄同株型黄瓜为材料,通过时空表达、亚细胞定位和功能分析,研究了GA信号转导因子CsGAIP(负调节因子)和CsGAMYB1(正调节因子)对黄瓜雄花形成的调控机制,旨在丰富黄瓜花芽性别发育的理论基础。取得的主要结果如下:1、黄瓜CsGAIP属于DELIA家族的同源基因,其N端含有DELLA和、/HYNP两个保守域;时空表达分析表明,CsGAIP主要在黄瓜的茎和雄花芽处表达,而在雄花发育过程中,CsGAIP的表达量主要集中在初期的花序分生组织、花分生组织、维管束和两性期的萼片原基、花瓣原基、雄蕊原基、雌蕊原基以及后期的花粉母细胞、花粉囊壁、花粉粒中,且在两性期的表达量最高;亚细胞定位分析显示,CsGAIP蛋白定位于细胞核;通过在拟南芥中的功能验证,发现CsGAIP的异位表达可部分恢复双突变体rga-24/gai-t6的植株高度、雄蕊发育以及植物育性表型,同时可通过下调花官属性基因AP3和PI的表达抑制野生型拟南芥的雄蕊发育。2、黄瓜CsGAMYB1属于GAMYB家族的同源基因,其序列中含有一个R2R3重复序列以及3个GAMYB家族特有的保守元件Box1、Box2、Box3;时空表达分析表明,CsGAMYB1主要在黄瓜的雄花芽处表达,且外源GA3处理可上调其表达,而在花发育过程中,CsGAMYB1的表达主要分布在初期的花序分生组织、花分生组织和两性期的萼片原基、花瓣原基、雄蕊原基、雌蕊原基以及雄花的花粉母细胞、花粉囊壁、花粉粒中,而在雌花的子房中有微弱的表达;亚细胞定位分析显示,CsGAMYB1蛋白定位于细胞核;通过在拟南芥中的功能验证,发现CsGAMYB1能部分恢复双突变体myb33myb65中雄蕊发育异常和不育的表型,但其过量表达可导致野生型拟南芥的雄性不育,推测其作用机制中存在一种剂量依赖效应;此外,通过黄瓜遗传转化体系,获得了CsGAMYB1干扰转基因植株,与对照相比,干扰植株中的雄花节与雌花节之间的比例显著下降,但乙烯合成基因F、M和内源乙烯含量没有明显变化,表明CsGAMYB1可调节黄瓜的性别表达,而乙烯没有参与此调控过程。
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