大黄素对自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

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目的:研究提纯的大黄素(纯度在98%以上)对自发性高血压大鼠(SpontaneouslyHypertensiveRat,SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BasilarArtertySmoothMusclesCells,BASMCs)大电导钙激活钾通道(Large-conductanceCa2+-activatedK+Channel,BKCa)的调节作用。方法:应用无痛尾动脉测压技术观察大黄素干预前后SHR血压的变化情况;应用压力小动脉测量仪观察大黄素干预前后SHR脑基底动脉直径的变化;应用全细胞膜片钳技术观察大黄素对SHRBASMCsBKCa介导的外向电流的调节作用;应用免疫组织化学技术观察大黄素干预前后SHRBASMCsBKCaβ1亚基的表达分布情况;应用WesternBlot技术研究给予大黄素干预前后SHRBASMCsBKCaβ1亚基表达的变化。结果:(1)给予大黄素干预后,高血压大鼠的血压由223±16mmHg降至127±12mmHg,和Wistar大鼠和大黄素干预组血压相比,均无统计学差异;(2)将血管段置于含有PE(10-5μmol/L)水浴槽中孵育20分钟,给予含有大黄素(10-5mol/L)和PE(10-5μmol/L)的PSS液体,给药前后血管直径分别为:246.6±14.9μm和293.3±21.7μm(n=6,p<0.05);(3)单个平滑肌细胞电压钳制在-40mV,在20-60mV下,大黄素(10-5mol/L)呈电压依赖性增加平滑肌细胞外向电流(n=6,p<0.05);依次给予10-7、10-6和10-5mol/L大黄素,平滑肌细胞外向电流(+60mV)随大黄素浓度的增加而增加(n=6,p<0.05);(4)TEA(10-3mol/L)和BKCa通道特异性阻断剂IBTX(10-7mol/L)均能阻断大黄素对BASMCs外向电流的增强作用(n=6,p<0.05);(5)将SHRBASMCs置于无钙离子的细胞外液中孵育30分钟;大黄素对BASMCs外向电流的增强作用消失(n=6,p<0.05);(6)尼莫地平和BAPTA-AM均能抑制大黄素对SHRBASMCs外向电流的增强作用(n=6,p<0.01);(7)应用免疫组织化学技术发现:大黄素干预后BKCa通道β1亚基光密度分布增加(P<0.01,n=4/group);(8)应用WesternBlot技术发现:Wistar大鼠组、SHR组和大黄素干预组BASMCsBKCa通道β1亚基表达量依次上调(n=4/group,p<0.01)。结论:大黄素一方面通过促进钙离子内流,从而激活更多的大电导钙激活钾通道开放,另一方面大黄素通过增加大电导钙激活钾通道β1亚基的表达,增加其对钙离子的敏感性,从而增强BKCa介导的外向电流,使平滑肌细胞超极化,引起脑基底动脉舒张,SHR血压降低。
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