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目的:观察小胶质细胞在不同浓度聚乙二醇2000(PEG2000)环境中的细胞状态,并确定适合用于小胶质细胞移植的浓度。进而以PEG2000与小胶质细胞混合移植对脊髓损伤大鼠进行治疗,并评估此治疗方式对脊髓损伤大鼠术后恢复的作用。方法:第一部分,从出生1-2天大鼠幼崽脑组织中分离纯化得到原代小胶质细胞。分别在含5%、10%、30%三种浓度PEG2000的细胞培养基中培养,分别用5%、10%、30%三种浓度PEG2000培养小胶质细胞,用CCK-8法、划痕实验、流式细胞分析、免疫印迹和免疫细胞化学染色等方法分别检测细胞活力,小胶质细胞对划痕损伤的迁移能力,吞噬能力以及对脂多糖(LPS)刺激反应的活化表型。第二部分,将第一部分体外培养实验筛选出的最适PEG2000培养浓度用于在体移植实验摸索小胶质细胞移植条件,包括尖端刺入脊髓的深度及进样速度等;并对移植细胞在体内的存活状态进行观察。第三部分,使用PEG2000作为介质将小胶质细胞移植到脊髓损伤大鼠的病灶,使用BBB评分评估脊髓损伤大鼠后肢运动功能,并在术后21天取材,免疫组化染色评估各组病灶面积大小、瘢痕形成情况及凋亡细胞数量。结果:第一部分,CCK-8法检测细胞活力发现,与对照组相比,5%、10%浓度PEG2000的细胞培养基培养对小胶质细胞活性没有影响,30%PEG2000细胞培养基中的小胶质细胞活性明显下降。免疫印迹与免疫细胞化学染色结果显示,不同浓度的PEG2000培养基环境不影响静息的原代小胶质细胞NF-κB p65的水平,而随着培养基环境中PEG2000浓度的增加i NOS表达水平逐渐降低,因此从免疫印迹角度看,PEG2000可以抑制小胶质细胞的炎性反应。并且,30%浓度的PEG2000培养基环境中小胶质细胞Arg-1表达相比对照组明显升高,有抗炎性转化的倾向。更重要的是,当LPS刺激6 h时,不同浓度PEG2000培养基环境中的小胶质细胞的i NOS、NF-κB-p65表达与对照组相比均减少,且随着PEG2000浓度增加,i NOS、NF-κB-p65水平逐渐下降。LPS刺激12 h后,其结果与刺激6 h的结果类似。免疫细胞化学染色显示了与免疫印迹相一致的结果,LPS刺激6小时后,含有PEG2000细胞的培养基中小胶质细胞i NOS表达是减低的,与之相反小胶质细胞Arg-1表达升高。LPS刺激12小时候后,随着培养基中PEG2000浓度的升高,小胶质细胞i NOS表达逐渐减低的,与之相反小胶质细胞Arg-1表达是升高的。在炎性刺激环境中,较低浓度的PEG2000(例如5%、10%)有抑制小胶质细胞炎性反应的倾向,并促进小胶质向抗炎表型转变。第二部分,将第一部分体外培养实验筛选出的最适小胶质细胞生存的PEG2000浓度用于在体移植实验,摸索出尖端刺入脊髓的深度为1.2 mm,进样速度为50nl/min进行细胞移植最合适,并在脊髓损伤病灶移植细胞后观察了术后21天内小胶质细胞的在体存活状态。第三部分,从第一部分实验结果得出10%以下的PEG2000浓度对小胶质细胞存活没有影响,将PEG2000与小胶质细胞混合移植到脊髓损伤大鼠的病灶,发现PEG2000联合小胶质细胞移植的脊髓损伤大鼠BBB评分明显恢复,免疫组化染色各组病灶面积大小及凋亡细胞数量也均好于其他组。结论:PEG2000具有良好的生物安全性,小胶质细胞在5%、10%浓度PEG2000环境中的能很好的存活,并且30%浓度的PEG2000诱导损伤病灶中小胶质细胞向M2抗炎表型转变,并且这种现象在LPS刺激的炎性环境中得到进一步强化;使用立体定位注射进行细胞移植是可行的;PEG2000和小胶质细胞混合移植对脊髓损伤大鼠进行治疗,可促进脊髓损伤大鼠术后运动功能的恢复,PEG2000协同损伤病灶中的移植小胶质细胞可能在脊髓损伤大鼠缩小病灶及减少组织等术后恢复过程发挥关键作用。