目的:角膜缘干细胞缺损是一组由多种疾病引起,并导致多种严重角膜及眼表变化的眼科疾病。角膜酸碱化学烧伤,热烧伤,Stevens-Johnson综合征,瘢痕性天疱疮等常引起严重的角膜缘干细胞缺损,表现为角膜上皮持续缺损、基质瘢痕、新生血管,最终导致角膜结膜化,不仅损害眼表结构,还严重影响患者的视功能。人们已经尝试多种方法治疗角膜缘干细胞缺损,包括角膜移植、角膜缘干细胞移植等。角膜移植、异体干细胞移植由于排斥反应常导致手术的失败。自体角膜缘干细胞移植由于不会发生排斥反应是治疗干细胞缺损的最佳治疗方案,但角膜缘干细胞缺损的患者常为双眼同时患病,干细胞来源有限,且手术对供眼存在潜在的危险,限制了其在临床上的应用。因此我们将取自兔自体的口腔粘膜上皮细胞进行体外培养增殖,代替来源有限的角膜缘干细胞,并以羊膜为载体移植治疗兔角膜碱烧伤所致的角膜缘干细胞缺损,通过与单纯去上皮羊膜移植比较治疗效果,探讨该术式的安全性和有效性,为严重角膜缘干细胞缺损的临床治疗提供实验依据。方法:21只新西兰兔(2–2.5kg)麻醉后,每只选1眼无菌条件下1mol/LNaOH溶液接触1min建立角膜碱烧伤动物模型。羊膜经EDTA处理后去除其上皮细胞。口腔粘膜上皮组织(4–6 mm2)从兔口腔获取,将组织块置37℃培养箱30 min,经1.25g/L胰酶0.2g/L EDTA混合液消化分离、收集细胞。对收集的细胞进行原代培养,采用含10%胎牛血清的DMEM培养液(pH7.4)。当培养细胞达到80 %～90 %融合时进行消化传代,绘制细胞生长曲线,按1×103个细胞/mm2面积接种于