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布病已成为乌兰察布地区严重的公共卫生问题,为揭示该地区布病高发的原因,提升布病防控诊疗效果。本研究对该地区的布病病原菌进行了分离,用三种方法对菌株进行了鉴定;用MLST调查了分离菌株的种群结构,用MLVA-16分型方法对菌株进行了基因分型,阐述菌株的基因分型特征及其流行病学关联,并对内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式进行了调查。同时,在体外进行了布鲁氏菌对10种常用药物敏感性的检测,对布鲁氏菌耐阿奇霉素和利福平的分子机制进行了初步检测,并对来自全国不同地区的149株羊种布鲁氏菌对利福平和复方新诺明的敏感性进行了筛查。1.本研究共分离布鲁氏菌116株,其中115株分离自人血,1株分离自羊脾;经3种方法鉴定全部为羊种布鲁氏菌,其中羊3型94株,羊1型22株;菌株分布于乌兰察布市境内的11个旗（县、市、区）及周边的内蒙古锡林郭勒盟、山西省大同市郊和河北省尚义县等地。初诊患者84例,构成比为73%;临床表现以疼痛、发热、乏力、多汗居多;77%（88/114）的患者就诊前无用药史,多于30%的患者存在误诊、误治。为该地区布病的防控和管理提供了全面系统的参考。2.本试验基于16Sr DNA基因对临床分离布鲁氏菌进行了遗传进化分析。试验证实布鲁氏菌16SrDNA基因高度保守,序列相似性为99%,是布鲁氏菌快速鉴定的最适靶基因。布鲁氏菌分离株与标准参考菌株的16Sr DNA基因的遗传距离相同、进化程度接近,无法鉴别菌株间的相互关联,16Sr DNA基因不适合用于布鲁氏菌的遗传关系分析;布鲁氏菌与人苍白杆菌亲缘关系较近,与其它试验菌株如霍乱弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌亲缘关系较远,为布鲁氏菌分类研究提供了参考。3.采用多位点序列分型试验对羊种布鲁氏菌的种群结构进行了分析。研究表明试验菌株的9个MLST位点的等位基因型完全相同,116株羊种布鲁氏菌全部为ST8序列型,虽分布广泛,但种群结构单一。ST8型菌是该地区的主要流行菌种,并与内蒙古其他地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,而且有密切的亲缘关系。4.应用多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）方法对布鲁氏菌进行了全面的基因分型和分子流行病学调查研究。MLVA-8鉴定了3个基因型,87%的菌株为基因42型;MLVA-11鉴定了8个基因型,所有的菌株均属东地中海血统;81%的菌株为基因116型,MLVA-11基因116型是该地区的主要基因型且广泛分布于整个乌兰察布及周边地区。在国际上首次发现了4个新的MLVA-11基因型,被国际数据库命名为342-345。MLVA-16将116株菌分为69个基因型,46个为独特基因型,每个菌株代表独特的基因型;表明乌兰察布地区的布病存在无流行病学相关的病例和零星、散发病例;其余23个为共享基因型,包含2-8株布鲁氏菌,提示菌株间存在流行病学关联。MLVA-16基因分型证实了该地区布病存在多点暴发流行和家庭内布病暴发,也证实了交叉感染病例的存在。同时,乌兰察布地区的菌株与全国10个省份的菌株间存在广泛的基因共享事件,提示可能存在流行病学关联。患病动物（疫羊）频繁、无序的转运和贩卖是该地区布病高发的主要原因。5.采用MLVA方法对内蒙古地区羊种布鲁氏菌的传播模式进行了调查,调查结果显示来自不同宿主的羊种布鲁氏菌分别共享相同或相似的MLVA-16基因型,表明羊种布鲁氏菌在羊牛（骆驼等野生动物）和骆驼等野生动物（羊牛）中相互循环扩散传播,最终传染给人群是内蒙古羊种布鲁氏菌的潜在传播模式;疫羊（牛）是内蒙古地区人间布病的主要传染源,与疫羊接触是内蒙古地区人间布病最主要的感染方式,骆驼（或其他野生动物）可能是羊布鲁氏菌的储存宿主。6.对羊种菌3个生物型的鉴别进行了探讨。根据羊种标准参考菌株16M RpoB基因的多态性和羊种布鲁氏菌串联重复Bru42位点的差异,建立了2种羊种布鲁氏菌的3个生物型的鉴别方法。2种方法对羊种标准菌株生物型的鉴定结果与常规鉴定方法结果一致。Rpo B-PCR对102株羊种布鲁氏菌的鉴定结果表明100株临床分离羊种菌（包括羊种生物1型34株,2型6株和3型60株）均鉴别为RpoB基因-2型,仅2株羊种生物1型菌鉴别为Rpo B基因-3型;而Bru42-PCR将102株临床分离羊种布鲁氏菌全部鉴别为Bru42基因-2型。实验结果表明临床分离羊种布鲁氏菌与羊种标准参考菌株的RpoB基因和Bru42位点存在显著差异,建立的方法不适合用于临床分离羊种布鲁氏菌的分型。7.在体外采用E-test法测定了85株羊种布鲁氏菌对10种临床常用药物的敏感性。实验表明布鲁氏菌对阿奇霉素、利福平和复方新诺明耐药菌株数分别为100%（85/85）,1.0%（1/85）和7.0%（6/85）。所有菌株对司帕沙星、米诺环素、多西环素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星均表现为敏感,司帕沙星和米诺环素具有最低的MIC值(MIC900 0.032μg/ml),且MIC90和MIC50相同;司帕沙星和米诺环素可作为治疗布病的首选药物。所有阿奇霉素耐药菌株的23SrRNA基因的第2632位碱基表现为T→C单位点突变,布鲁氏菌23Sr RNA转肽酶中心的T/C点突变可能是一种羊种布鲁氏菌对阿奇霉素耐药的分子机制。利福平耐药菌株未见Rpo B基因发生突变;此外,本试验对来自全国24个省区的149株羊种布鲁氏菌对利福平和复方新诺明的敏感性进行了筛查,结果显示羊种布鲁氏菌对复方新诺明的耐药率为25.5%（38/149）,耐药菌株分布于18个省市区;试验菌株对利福平表现为敏感。