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以昆明雌性小白鼠为受试动物,将体外培养至扩张囊胚(hCG后113h)的小鼠胚胎分别施以38℃温和热应激和40℃强烈热应激处理1h,2h和3h,然后在37℃正常培养条件下分别恢复3h,2h和1h,用体视显微镜观察hCG后161h的囊胚孵出率以及经38℃和40℃诱导热应激后囊胚的孵出率,用Western blot技术检测小鼠囊胚HSP70及HSP72的表达,以研究小鼠囊胚的热敏性、热应激对小鼠囊胚HSP70及HSP72表达的影响以及囊胚热耐受的获得与HSP72表达之间的关系。试验结果如下:
1.热应激对囊胚孵出率的影响。热应激组囊胚孵出率均低于对照组,40℃热应激处理不同时间各组囊胚孵出率(分别为58.53%,47.85%和45.28%)均低于38℃热应激处理的各相应组(分别为62.98%,57.35%和51.27%)。热应激处理2h和3h时,40℃热应激组的囊胚孵出率(分别为47.85%和45.28%)显著(P<0.05)低于38℃热应激组(57.35%和51.27%);热应激处理1h时,囊胚孵出率在38℃和40℃组间无显著差异(P>0.05)。
在38℃和40℃热应激组,囊胚孵出率均随着热应激时间的延长而降低。38℃组内热应激处理1h,2h和3h囊胚孵出率分别为62.98%,57.35%和51.27%,三组之间差异显著(P<0.05);40℃热应激处理1h囊胚孵出率(58.53%)显著(P<0.05)高于热应激处理2h(47.85%)和3h(45.28%);囊胚孵出率在40℃热应激处理2h(47.85%)和3h(45.28%)之间无显著差异(P>0.05)。
2.诱导热应激对囊胚孵出率的影响。先经38℃热诱导1h,2h和3h,再经40℃强烈热应激处理2h后囊胚的孵出率(49.18%,54:74%和53.36%)均高于40℃强烈热应激处理2h组(47.85%)。其中38℃热诱导2h囊胚孵出率最高(54.74%),与40℃强烈热应激处理2h组(47.85%)相比差异显著(P<0.05)。
3.热应激对囊胚HSP70表达的影响。38℃热应激组内,囊胚HSP70表达量随热应激时间的延长呈增加趋势。38℃热应激处理3h囊胚HSP70表达量(1.11)显著(P<0.05)高于对照组(0.94);38℃热应激处理1h和2h袭胚HSP70表达量(0.96和0.97)与对照组(0.94)相比无显著差异(P>0.05)。 40℃热应激组囊胚HSP70表达量随热应激时间的延长先减少后增加。40℃热应激处理1h和3h囊胚HSP70表达量(1.17和1.13)均显著(P<0.05)高于对照组0.97的表达量;40℃热应激处理2h囊胚HSP70表达量(0.92)与对照组(0.97)相比无显著差异(P>0.05)。
4.热应激对囊胚HSP72表达的影响。对照组和38℃、40℃热应激组的囊胚均有HSP72的表达。其中,38℃热应激处理211囊胚HSP72表达量(0.85)显著(P<0.05)高于对照组(0.66);38℃热应激处理1h和3h囊胚HSP72表达量(0.72和0.78)均高于对照组(0.66),但与对照相比无显著差异(P>0.05)。
40℃热应激组囊胚表达量随热应激时间的延长呈增加趋势。热诱导组囊胚孵出率与38℃热应激组囊胚HSP72的表达量呈正相关。