黄瓜(Cumcumis sativus L.)是一种世界性的重要蔬菜,在农业生产和国民经济中占有极其重要的地位。但是在农业生产中特别是设施栽培中,黄瓜经常受到持续阴雨天气或雾霾天气低温、弱光、短日照等因素的影响授粉受精不良,造成“化瓜”,严重影响黄瓜栽培的高产、优质和效益,造成巨大的经济损失。近些年来,基因工程飞速发展为我们提供了一个新型、快速的育种平台。由于黄瓜的遗传基础狭窄、传统育种年限较长、效率低等因素,利用常规育种较难获得突破性进展,因此利用植物基因工程手段对其进行遗传改良是一种有效的途径。高效、稳定的离体再生和遗传转化体系是黄瓜转基因育种的基础。本试验以“津优1号”黄瓜子叶、子叶节作外植体,研究了外植体类型和不同激素组合和激素浓度对黄瓜离体分化的影响,建立了高频、稳定的黄瓜离体再生体系;同时研究了不同的Kan浓度、侵染时间、预培养、共培养时间和AS浓度对黄瓜遗传转化的影响,优化和建立了高效遗传转化体系;在此基础之上,通过基因工程技术,将扩张蛋白基因CsEXP10导入黄瓜,获得转基因植株,为实现黄瓜种质创新和分子改良提供理论依据。主要研究结果如下:1.以“津优1号”为试验材料建立了黄瓜子叶节高效再生体系。黄瓜种子温汤浸种后流水冲洗4~5 h,在超净工作台上用70%酒精消毒1 min,用0.1%的升汞消毒15~20min,最后用无菌水冲洗5~6次,将种子接种到MS基本培养基上;待黄瓜无菌苗生长5~6 d左右两片子叶未完全张开,切去生长点,两片子叶均切去上半部分1/2~2/3,下胚轴纵切,保留2 mm下胚轴,置于37个子叶节芽诱导培养基上,其中在MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L AgNO3培养基上,芽分化频率较高,为96.2%,每块外植体再生芽数可达4.38;在MS培养基上生根率可达100%,40~50 d可得到完整再生植株。2.在建立黄瓜子叶节再生体系的基础上,从侵染时间、预培养时间及共培养时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、生根培养等几方面,建立和优化农杆菌介导黄瓜遗传转化体系。取预培养2 d的子叶节,用活化的农杆菌菌液(菌液中加100μmol/L AS)侵染15 min,在无菌吸水纸上吸干表面液体,在共培养基中培养2 d,然后置于筛选培养基:MS+2.0 mg/L6-BA+2.0 mg/L AgNO3+300 mg/L Cef+100 mg/L Kan进行不定芽诱导培养,可获得较高的转化效率。3.转基因植株的分子检测。抗性植株,经过PCR检测,得到了12株阳性转基因苗;GUS染色检测,结果发现共有9株呈现出蓝色,初步证明这9株是转基因植株,阳性率为1.81%。