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金葡菌肠毒素（Staphylococcal enterotoxins，SE）是一组由金黄色葡萄球菌分泌至胞外的水溶性蛋白，依据血清分型主要有肠毒素A、B、C、D、E等。其中肠毒素C又分为C1，C2，C3三个亚型。与普通抗原比，金葡菌肠毒素在很低浓度时就能活化的大量T细胞并产生强大免疫效应，因此被认为是超抗原。在肠毒素家族中，肠毒素A、B研究较多，肠毒素C则研究较少。本研究的前期工作已从一种由金葡菌培养产物制得的生物制品-金葡素注射液的原液中提取了肠毒素，经氨基酸序列测定和比较确定是肠毒素C2亚型，并通过药效学试验证实了SEC2是金葡素注射液有效成分。由上述实验可认为，SEC2含量是控制产品质量的可信指标。因此，建立一种简便可靠的定量检测SEC2的方法就十分必要。本课题通过制备抗SEC2的特异性单克隆抗体，建立了检测SEC2的双抗体夹心ELISA法。采用杂交瘤单克隆技术，运用已建立的间接ELISA法筛选，获得四株分泌抗SEC2单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）的杂交瘤细胞株。四个杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体的Ig类别均为IgG1（k），效价达1∶105—1∶107。采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化各株杂交瘤细胞腹水，经SDS-PAGE电泳分析，纯化各株McAbs的纯度均在80％以上。各株抗SEC2 McAbs能特异性识别SEC2，与牛血清白蛋白，人血清白蛋白及SEA、SEB、SEC1、SED型肠毒素无交叉反应，仅McAb387与高剂量（＞1μg／ml）的SEC1有交叉反应。采用非竞争法测得4株McAbs亲和常数在1.1×109M-1至2.46×1010M-1之间。应用常规方法标记纯化McAbs，并经阻断抑制试验筛选McAbs识别位点，其中只有McAb 4F7和McAb 4D7之间识别抗原位点完全相关，其余McAbs之间识别抗原位点完全不相关。选择二株识别不同抗原位点的抗SEC2McAbs，运用于双抗体夹心抗原的ELISA方法，建立定量检测SEC2的ELISA方法，灵敏度为0.5ng／L，批内变异系数为3.71％至6.93％，批间平均数变异系数1.02％，回收率为97.8％至101％，回收率实验变异系数为2.2％至5.2％。应用建立的单克隆抗体ELISA法测定了40批厂家送检的金葡素注射液样品中SEC2含量，同时与多克隆抗体ELISA法测定结果比较，结果显示两方法测定的SEC2含量无显著差异，单克隆抗体法结果略低于多克隆抗体法。50批金葡素注射液的SEC2含量在5-16ng／ml之间，变异系数为16.8％。本研究成功的制备了抗SEC2 McAbs，建立了特异、准确的定量检测ELISA方法，并用于金葡素注射液制品的SEC2含量检测，为超抗原研究和金葡素注射液质量控制提供了有力的手段。甘露（聚）糖结合凝集素（mannose-binding lectin or mannan-binding lectin；MBL）s是由肝脏分泌的具有胶原样结构的Ca2+依赖的血浆C型凝集素，是先天免疫的重要组成部分。通过其糖基识别域MBL可识别并结合至很多微生物病原体的表面，随后激活补体系统发挥中和和／或调理作用。作固有免疫成分和急性期蛋白，特别是在后天免疫系统成熟前阶段和在感染后IgM出现之前，MBL都有重要意义。血循环中MBL含量水平主要由基因型决定，但许多非基因因素也对它有明显影响。MBL不足或缺失与反复感染、反复流产、自身免疫病以及某些肿瘤等许多疾病相关。定量检测MBL的试剂盒是进行相关研究的必要条件，但目前MBL国内没有这种试剂盒，进行MBL相关研究工作主要依赖进口试剂盒，其价格昂贵，影响了国内的研究发展。本课题通过采用杂交瘤技术制备了两株抗人MBL单克隆抗体（monoclonalantibody，McAb）并建立了MBL的定量ELISA检测方法。研制了MBL检测试剂盒，并初步应用于检测不同人群的MBL含量。以健康人血浆纯化的MBL为抗原免疫小鼠，运用已建立的间接ELISA法筛选，获得两株分泌抗人MBL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体的Ig类别均为IgG1（K），效价达1∶106—1∶107，识别不同抗原位点。两株McAbs能特异性识别MBL，与牛血清白蛋白，人血清白蛋白及由基因突变导致的MBL缺失的阴性血清无交叉反应。采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化各株杂交瘤细胞腹水，经SDS-PAGE电泳分析，纯化各株McAbs的纯度均在90％以上。应用常规方法标记经纯化的McAb-B3。运用两株McAb建立定量检测MBL的ELISA方法，最佳检测条件为8μg／ml浓度包被抗体B10，1∶500稀释酶标抗体B3。该方法特异、灵敏，有较好重复性。其准确定量的检测范围为1～100ng／ml。批内变异系数3.9％至5.2％，批间平均数变异系数为1.6％，均回收率为98.0％至105.3％，回收率实验变异系数为2.1％至4.3％。应用建立的单克隆抗体ELISA法测定了52例健康人血清MBL含量，与丹麦试剂盒测定结果比较，两方法测定的MBL含量有较好一致性。本研究的方法检测范围更宽。用自建的MBL单抗ELISA夹心法对277例侗壮两民族血清MBL含量水平进行调查。结果经统计学分析显示，MBL含量侗族低于壮族（p＜0.01），不同性别间无差异，不同年龄的MBL含量，在青春期明显高于其它各时期（p＜0.01），MBL缺失率在青春期明显低于其他各时期，MBL缺失率与MBL含量存在负相关。对MBL低下的样本进行基因突变检测，其中ExonⅠ54位密码子突变51例，57位密码子突变1例，没有52位密码子突变。所有突变的样本其MBL含量均低于1μg／ml，MBL含量低下与ExonⅠ密码子突变密切相关。另一调查检测了204例儿童血清MBL水平，103例感染患儿（肺炎、脑炎、腹泻、败血症）MBL水平明显高于101例正常健康儿童，表明感染会导致MBL升高，MBL低水平可能与易发感染相关。