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前言 一氧化碳（CO）中毒是急性中毒中最常见的一种，其引起急性脑损伤和迟发神经精神症（DNS）的机制至今尚未明确。近年来，免疫机制尤其是细胞因子在神经系统疾病中的作用倍受关注。有研究表明，部分CO中毒患者有大脑白质脱髓鞘的病理改变；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-10（IL-10）参与了多种神经系统脱髓鞘疾病的发生发展；CO中毒患者血清TNF-α水平升高，高压氧（HBO）治疗使其水平明显下降。据此，本实验采用双抗体夹心ELISA法对大鼠急性CO中毒后及中毒大鼠HBO治疗后脑内TNF-α与IL-10水平进行检测，以探讨TNF-α和IL-10在CO中毒脑损伤中的作用，进一步明确HBO的保护机制。 材料与方法 1．实验动物及分组：健康Wistar大鼠40只，雄性21只，雌性19只，体重180～220g，随机分成8组，每组5只，分别为正常对照组（C组），CO中毒即刻组（0h组），CO中毒后3h、6h、24h、72h组，高压氧治疗组（HBO1和HBO2组，分别为高压氧治疗后吸入空气存活3h和6h）。 2．CO中毒大鼠模型的建立：参照Ishiropoukos H的方法，将大鼠放入密闭染毒瓶内，充入CO气，以CO快速检测管监测染毒瓶中CO浓度，使大鼠静息吸入浓度2000～2500ppm的CO气体50～60min。 3．高压氧治疗：将HBO1及HBO2组大鼠于染毒后20min内放人高压氧舱，升压15min，稳压p)吸纯氧60ndn，降压15ndn出舱，舱内温度保持5－19℃。 4．取脑及制备脑组织匀浆：以 10％水含氯醛瞩00mg／kg)对大鼠行腹腔麻醉。断头后迅速于冰上分离出大脑，－20℃冰箱保存。取大脑组织按20％（体重／体积）比加人含苯丙碳酸氟（PMSF）lmM的 PBS（PH7．4），低温匀浆、粉碎／℃离心（12000n）15 min，取上清一20℃冰箱保存。 5．TNF－。和IL河 的测定：按试剂盒说明对待测上清标本进行操作，根据标准品OD值绘制TNF—a和IL－10的标准曲线，由标本 OD值在标准曲线上查出 TNF－a和几一10含量（pg·rnl－‘人用酚试剂法测出各标本蛋白含量bg·Inl－‘入TNF－a及IL－10的最终结果用 pg·mgprot－’表m。 6．统计学处理：实验数据以均数。标准差＊。S）表示，统计学分析采用方差分析方法。 实验结果 1．CO中毒后脑TNF－a的变化：急性CO中毒后3h，脑TNF－a水平升高（P＜0．05），至6h达高峰（P＜0．01），的h仍显著高于对照组瞩＜o．01人至72h脑TN F－。水平有所下降，但仍高于对照组（P＜o．05）。 2．CO中毒后脑o－10的变化：急性CO中毒后3－6h，脑ILJ 水平升高不明显，至中毒后Hh升高达峰值河＜O．05L中毒后72h有所下降，但仍高于对照组河＜o．05人 3．HBO治疗对脑TNF一二、IL－10水平的影响：染毒后经HBO治疗存活6h的大鼠与染毒后未经 HBO治疗存活6h的大鼠相比，脑rfN F－a有所降低u＜o．05X但仍高于对照组(P＜0．05h染毒后经HBO治疗存活3h和6h的大鼠分别与染毒后未 ·2·经 HBO治疗存活 3h和 6h的大鼠相比较，脑 IL—10水平均无显著性差异（P＞O．05）。 讨 论 1．CO中毒与脑TNF一队本实验观察到，急性CO中毒早期脑内TNF－a水平迅速升高并持续表达，这可能是CO中毒后脑缺氧缺血，小胶质细胞、星形胶质细胞、侵人的白细胞持续分泌TNF－a的结果。此外，早期产生的sr一。能活化血小板活化因子河AF人后者可进一步刺激TNF－a的表达。研究表明，TNF－。的过量产生和释放可通过诱发和促进炎症、细胞毒性、免疫损伤。凝血等反应及多种凋亡途径，间接引起继发神经元损伤。而且，TNF－。能诱使脱髓鞘改变和反应性神经胶质增生，这可能构成部分 CO中毒患者大脑白质脱髓鞘改变的重要原因。本研究由时间顺序推测人O中毒后脑内早期产生的TNF－。可能参与了急性脑损伤，而晚期高浓度的TNF－a可能参与CO中毒DNS的发生。 2．CO中毒与脑IL—10：本实验发现CO中毒后脑内IL－10水平的升高较TNF－。表现出延迟的趋势。脑内IL－10的延迟表达可能是TNF一。诱导下由小胶质细胞产生的，因为CO中毒早期脑内TNF－。迅速升高，而体外实验中TNF－a能以剂量依赖的方式引起人胚胎小胶质细胞培养物中IL－10释放增加，IL－10 mRNA表达上调。目前研究已证明，不论外源性还是内源性IL人 都能抑制中枢神经系统（CNS）内TNF－。的产生，减少TNF－a引起的神经毒性作用。由此推断人O中毒晚期脑内增多的IL河 能抑制TNF－a的产生和致炎活性，减轻中毒后的继发性损伤，具有神经保护作用。 3．HBO治疗对脑TNF－。与IL叫0的影响：本实验结果表明HBO治疗能降低急性CO中毒早期脑内TNF－a的表达，这可能 ·3·由于高压氧纠正脑缺氧，打断了缺氧诱发小胶质细胞活化产生’fNF－。的径路，从而减轻由TNF－a诱发的脑内继发损伤。但经1次HBO治疗6h后，脑内TNF－a水平仍高于对照组，说明HBO对CO中毒早期脑内TNF－a产生的抑制作用是有限的。本实验