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研究背景鬼臼毒素(podophyllotoxin,POD)是从足叶草及八角莲的根茎中提取的一种具有显著抗病毒和抗肿瘤作用的天然活性木脂素。1990年WHO将鬼臼毒素酊剂(podophyllotoxin tincture,POD-T)外用作为治疗生殖器疣的一线治疗方案。然而,POD-T对生殖道黏膜刺激性大,使宫颈局部组织感染风险增加,且容易被吸收中毒,故不适合用于女性宫颈尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)的治疗。20世纪以来,纳米脂质载体作为纳米制剂新剂型已广泛应用于临床研究,在生殖道黏膜给药中具有较好的应用前景。研究目的自制0.5%POD-NLC并检测其理化特性。建立西藏小型猪宫颈给药模型,以POD-酊剂为对照组,探讨其对小型猪宫颈黏膜的刺激性及系统毒性,进一步评价其安全性。材料与方法1、采用改良乳化蒸发-低温固化法,自制0.5%POD-NLC。考察0.5%POD-NLC外观、粒径、包封率及微观形态。2、选用不同剂量0.5%POD-NLC作为实验组,0.5%POD-T作阳性对照,观察宫颈黏膜的肉眼及病理改变;LUMINEX检测各实验组中宫颈分泌物IL-1β、IL-6、IL-8 的浓度。3、选用0.5%POD-NLC及不同浓度POD-T(0.5%,1%,2%),分别于小型猪宫颈给药2h,4h,6h,8h,10h后检测宫颈分泌物、宫颈黏膜组织POD浓度,评估0.5%POD-NLC的体内代谢规律。4、将不同剂量药物经小型猪宫颈黏膜给药,分别检测给药后2h、4h、6h、8h、10h血药浓度,分析0.5%POD-NLC经小型猪宫颈黏膜给药后血液中POD浓度变化,评估系统安全性。5、经宫颈黏膜给药后予小型猪前腔静脉取血,采用全自动生化仪测定各类生化指标;全自动血细胞分析仪测定各类血细胞数及血红蛋白含量,评估POD-NLC经小型猪宫颈黏膜给药后其血液生理生化指标改变。6、采用SPSS20.0(PASW)进行数据统计、描述与分析,数据以X±S表示。P<0.05代表组间比较具有统计学差异。结果与分析1、成功制备0.5%POD-NLC,外观为质地均匀半透明胶状乳剂。马尔文型粒径分析仪检测POD-NLC粒径为178.5±20nm,包封率为(75.7±0.44)%,电镜扫描分析仪显示POD-NLC呈规则圆形及类圆形,分布均匀一致。2、小型猪宫颈黏膜刺激性评分结果显示,POD-T组总分值显著高于同等剂量POD-NLC组,差异具有统计学意义(p=0.001)。POD-NLC大剂量组总分值显著高于POD-NLC小剂量组,而生理盐水(NS)组总分值较POD-NLC小剂量组略低,无显著差异(p=0.092)。小型猪宫颈分泌物各因子浓度检测结果提示,POD-NLC小剂量组IL-1β、IL-6、IL-8浓度显著低于POD-NLC大剂量组(p<0.01),而与NS组相比无明显差异(p>0.05)。POD-T组各因子浓度较POD-NLC大剂量组升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。3、在相同给药时间内,0.5%POD-NLC组宫颈黏液中POD浓度均高于0.5%POD-T组(p<0.05)。0.5%POD-T组宫颈黏膜组织中药物浓度最高峰值出现在给药后4h,随后快速下降。给药1Oh内,0.5%POD-NLC组黏膜中药物浓度呈缓慢持续升高,未见明显峰值;至给药10h,0.5%POD-NLC组黏膜组织中药物浓度开始高于0.5%POD-T组。4、宫颈给药1ml时,0.5%POD-NLC组未能测及POD血药浓度;0.5%POD-T组血药浓度最高峰值出现在给药后4h,并于给药后10h内呈低浓度持续出现。宫颈给药2ml时,0.5%POD-T组血药浓度显著高于0.5%POD-NLC组,差异具有显著意义(P<0.05),0.5%POD-NLC组血药浓度变化平缓,未见明显峰值,给药10h后血药浓度未能测及。5、小型猪经POD-NLC、POD-T宫颈黏膜给药后,ALT、AST平均测定值均较给药前略高,但差异无统计学意义(p>0.05)。各剂量组给药后白细胞测定值均较给药略高,但差异无统计学意义(p>0.05)。0.5%POD-NLC(2ml)经小型猪宫颈黏膜给药后,未见明显系统毒性。结论本研究证实自制POD-NLC具有粒径小、稳定性好、包封率高等特点。POD-NLC经小型猪宫颈给药后局部刺激性小,同时可长时间滞留于宫颈分泌物中,并于宫颈黏膜组织中持续缓慢释药;常规治疗剂量POD-NLC对宫颈黏膜刺激性小,且经黏膜吸收量少,具有较好的系统安全性。