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目的:建立实验性结肠炎大鼠模型,研究青藤碱对实验性结肠炎大鼠的疗效,对实验性结肠炎大鼠肠黏膜炎症细胞因子水平的作用,探讨青藤碱能否通过调节TLR4受体活性而发挥肠黏膜保护作用。检测大鼠肠黏膜SOCS2、SOCS3的表达水平,进一步探索结肠炎的发病机制,为青藤碱的进一步临床应用提供理论依据。 方法:(1)将40只健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠随机均分为四组,正常对照组(normal control group,A组)、结肠炎模型组(model group,B组)、柳氮磺胺吡啶治疗组(sulfasalazine group,SASP group,C组),青藤碱治疗组(sinomenine group,SIN group, D组)。除正常对照组外,余三组均采用三硝基苯磺酸/乙醇法构建结肠炎大鼠模型,造模24小时后,A组和B组给予1.5毫升生理盐水灌胃,C组每天给予200mg/kg柳氮磺胺吡啶溶液灌胃,D组给予200mg/kg青藤碱溶液灌胃,均连续给药7天;(2)观察记录各组大鼠大体情况,评价各组疾病活动指数(disease activity index,DAI)和大体形态损伤指数(colon macroscopic damage index,CMDI);应用苏木精伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察结肠组织病理学改变,评价各组组织学损伤指数(tissue damage index,TDI);(3)采用免疫透射比浊法测定血清C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP);(4)逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-Polymerase chain reaction, RT-PCR)测定结肠组织TLR4、IL-6、TNF-α、IL-10和SOCS2/3mRNA的表达变化;(5)应用蛋白印迹法测定结肠组织TLR4和SOCS2/3蛋白的表达。 结果:(1)成功建立实验性结肠炎大鼠模型,造模后大鼠出现腹泻、便血等消化道症状;(2)肉眼观察模型组大鼠结肠充血水肿,肠黏膜不同程度坏死、糜烂溃疡形成;HE染色后镜下观察发现结肠炎大鼠黏膜坏死脱落,黏膜层、黏膜下层大量炎性细胞浸润,腺体结构紊乱,可见隐窝脓肿。DAI评分:青藤碱组大鼠评分低于模型组(2.3±0.67 vs4.5±1.08, P<0.01);CMDI评分:青藤碱组大鼠肠黏膜炎症较模型组减轻(2.70±1.16 vs6.20±1.43, P<0.01);TDI评分:青藤碱组低于模型组(2.60±1.03 vs5.50±1.44, P<0.01);(3)青藤碱组大鼠血清CRP浓度较模型组降低(50.03±1.56mg/l vs53.14±1.71 mg/l, P<0.05);(4)RT-PCR:青藤碱组大鼠结肠组织IL-6mRNA相对表达水平低于模型组(0.07±0.02 vs0.15±0.01, P<0.05);青藤碱组TNF-αmRNA相对表达水平较模型组明显降低(0.20±0.12 vs0.62±0.09, P<0.01);青藤碱组IL-10 mRNA相对表达水平与模型组相比无统计学差异;青藤碱组TLR4mRNA表达水平较模型组下降(0.16±0.02 vs0.35±0.03, P<0.05);青藤碱组SOCS2mRNA表达水平低于模型组(0.34±0.05 vs0.58±0.10, P<0.05);青藤碱组SOCS3mRNA相对表达水平较模型组下降(0.12±0.04 vs0.39±0.06, P<0.05);(5)Western blot:青藤碱组大鼠结肠组织TLR4蛋白相对表达水平分较模型组降低(1.04±0.28 vs1.71±0.22, P<0.05),SOCS2蛋白表达水平低于模型组(0.14±0.02 vs0.70±0.05, P<0.05),SOCS3蛋白相对表达水平较模型组明显降低(0.11±0.05 vs0.84±0.12, P<0.01)。 结论:青藤碱能够改善实验性结肠炎大鼠的肠黏膜炎症,可显著下调结肠组织TLR4及IL-6、TNF-α等因子的表达;青藤碱抑制TLR4炎症信号通路转导可能是其保护肠黏膜的作用机制之一;实验性结肠炎模型中肠黏膜SOCS2/3的表达上调可能与TLR4的过度活化有关。