随着科学技术的发展,研究者针对肿瘤微环境探索出许多微环境特定响应型药物载体——刺激响应性载体,刺激响应性载体包括pH响应性载体、还原响应性载体、光响应性载体、超声响应性载体、磁场响应性载体和热响应性载体以及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）响应载体。ROS响应性载体已成为近年来药物载体研究的热点,相继出现了含硫多聚物ROS响应性载体、含硒多聚物ROS响应性载体、含碲多聚物ROS响应性载体和含不饱和磷脂ROS响应性载体等。在众多的ROS响应性载体中,含不饱和磷脂ROS响应性载体最具发展潜力,不饱和磷脂能被¹O₂快速氧化,从而实现载体中药物的快速释放。然而在具有多个病理情况时,单一地依靠ROS响应性载体并不能保证药物在特定部位释放,而光敏剂在光照后可以产生¹O₂,含不饱和磷脂载体能够实现¹O₂为基础的ROS响应。ROS响应脂质体材料DLPC是一种不饱和磷脂,具有四个不饱和双键,具有很强的ROS响应活性。PdPC（OBu）₈是一种高效光敏剂,在光照的情况下可以产生大量¹O₂,能使不饱和磷脂快速氧化。光敏剂在特定波长光照射下能产生¹O₂,¹O₂不仅具有氧化不饱和磷脂的特性,而且具有光动力治疗的作用,从而改善ROS响应脂质体的治疗效果。因此,本研究设计并研究载光敏剂ROS响应性载体,以二亚油酰磷脂酰胆碱（1,2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DLPC）为ROS响应材料,1,4,8,11,15,18,22,25-八丁氧基酞菁钯[1,4,8,11,15,18,22,25-octabutoxypalladium phthalocyanine,PdPC（OBu）₈]为产生¹O₂的光敏剂,构建以DLPC为响应物质的光敏ROS响应脂质体（LPD）,探究LPD的体内外抗肿瘤活性。首先,合成了光敏剂PdPC（OBu）₈并进行了结构鉴定,然后建立了盐酸阿霉素（Doxorubicin hydrochloride,DOX）和PdPC（OBu）₈的含量检测方法。采用荧光分光光度法测定DOX含量,DOX浓度在1-20μg·mL^-1时,线性回归方程为F=8.9337C+0.2412（R2=0.9995）。然后对DOX的HPLC方法进行了探索,DOX线性范围浓度为0.2-25μg·mL^-1,线性回归方程为A=0.4494C+0.0100（R2=1）。采用紫外可见光分光光度法测定PdPC（OBu）₈的含量,PdPC（OBu）₈浓度在2-12μg·mL^-1时,线性回归方程为A=0.0823C+0.0157（R2=0.9994）。本文还对PdPC（OBu）₈的HPLC检测方法进行了探索,PdPC（OBu）₈线性范围浓度为0.5-20μg·mL^-1,线性回归方程为A=0.1002C-0.0054（R2=1）。其次,进行了LPD的处方筛选及表征。LPD的最优处方为DLPC用量为5%,胆固醇用量为40%,DSPE-PEG2000用量为5%,DSPC用量为50%（摩尔比）,PdPC（OBu）₈投药量为药脂比（m:m）1:200。LPD粒径为（169.3±1.2）nm,PDI为0.198±0.003,粒径均匀,分散性良好,zeta电位为（-39.8±0.8）mV。PdPC（OBu）₈的包封率约为（84.43±3.12）%,载药量为（0.42±0.01）%。DOX的包封率为（91.03±3.33）%,载药量为（9.84±0.40）%。LPD具有良好的储存稳定性和良好的血清中稳定性。实验表明LPD在未光照的情况下,药物基本不释放;在光照(730 nm,300mW·cm^-2)的情况下,照射5min药物释放率达到（95.5±2.5）%（P<0.05）,说明LPD具有ROS响应快速释放药物的特性。LPD光照前不产生¹O₂,光照(730 nm,300mW·cm^-2,3 min)后产生大量¹O₂,因此LPD在光照时实现ROS响应。再次,以乳腺癌MCF-7细胞为模型细胞,探索了LPD的体外抗肿瘤活性研究。实验发现光照强度对MCF-7细胞没有毒性。PdPC（OBu）₈脂质体（LP）在未光照前对MCF-7细胞具有较弱的毒性,光照(730 nm,1200 mW·cm^-2,3 min)后细胞毒性显著增强。LPD可以促进DOX在MCF-7细胞中的摄取,并且DOX经细胞摄取后主要分布于溶酶体。LPD进入细胞是通过小窝蛋白介导的能量依赖型内吞途径,并且LPD在活细胞内能产生少量ROS,光照(730 nm,1200 mW·cm^-2,3 min)后产生大量ROS。最后,以乳腺癌MCF-7细胞为模型细胞,以裸鼠为模型动物,探索了LPD的体内抗肿瘤活性研究。DOX的HPLC-MS分析方法特异性良好,线性范围在1-1000ng·mL^-1,线性回归方程为A_DOX/A_DNX=0.0003C+0.0116,R2=0.9986,具有良好的基质效应和提取回收率,具有较好的准确度和精密度,因此,该DOX的HPLC-MS分析方法可以作为DOX药代动力学的检测方法。游离DOX的半衰期为1.42 h,LPD的半衰期为7.16 h,是游离DOX半衰期的5.04倍,具有显著性差异;非ROS响应脂质体（HPD）的半衰期为11.39 h,是游离DOX半衰期的8.02倍,具有显著性差异;表明LPD与HPD均可以延长DOX的半衰期。相对于游离DOX,LPD具有清除率小,AUC大的特征。载Amplex UltraRed光敏ROS响应脂质体（LPU）在不光照时,经活体成像扫描发现肿瘤部位没有荧光,脂质体给药后光照(730 nm,1200 mW·cm^-2,5min),经扫描发现肿瘤部位具有明显的荧光,表明LPU光照后能够产生ROS。游离DiR在肝、脾具有明显荧光,表明游离DiR主要分布在肝、脾部位。载DiR光敏ROS响应脂质体（LDiR）在肝、肿瘤具有明显荧光,表明DiR主要分布在肝、肿瘤部位。因此,说明LPD具有被动靶向性。空白脂质体（BP）和LP无抗肿瘤活性。游离DOX、DOX脂质体（LD）、光照处理(730 nm,1200 mW·cm^-2,5 min)的DOX脂质体（LD+hv）以及LPD具有相似的抗肿瘤活性,光照处理(730 nm,1200 mW·cm^-2,5 min)的LP具有较好的抗肿瘤活性,说明光照显著增强LP的抗肿瘤活性。光照处理(730 nm,1200mW·cm^-2,5 min)的LPD（LPD+hv）具有最为显著的抗肿瘤活性,原因可能是DOX的化疗作用与PdPC（OBu）₈光照产生的单线态氧光动力治疗的联合作用。未光照处理的HPD具有抗肿瘤活性,光照(730 nm,1200 mW·cm^-2,5 min)后抗肿瘤活性增强。然而LPD未光照时就具有与HPD光照后相似的抗肿瘤活性,光敏ROS响应脂质体光照(730 nm,1200 mW·cm^-2,5 min)后抗肿瘤活性显著增强。因此光敏ROS响应脂质体光照后具有最为显著的抗肿瘤活性。总之,本研究初步证明了LPD具有ROS响应特性,能够增强细胞毒性,增强细胞摄取,在动物体内的靶向特征明显,体内抗肿瘤活性显著,同时具有光动力治疗、化疗与光敏释药的作用,具有较好的发展前景。此外,LPD制备过程简单,对纳米药物产业化具有一定的指导意义。