【摘 要】
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Survivin是IAP家族成员,具有抗凋亡和调控细胞分裂的双重功能,广泛表达于各种胚胎组织和癌细胞中,但在正常终末分化细胞中不表达。这些特点使survivin在肿瘤发生发展的研究中
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Survivin是IAP家族成员,具有抗凋亡和调控细胞分裂的双重功能,广泛表达于各种胚胎组织和癌细胞中,但在正常终末分化细胞中不表达。这些特点使survivin在肿瘤发生发展的研究中作用日益凸现。 本论文是要为肿瘤疫苗的设计做一些基础研究。肿瘤疫苗设计的关键是安全性和免疫原性。基于这两点拟采用survivin抗凋亡功能缺失的剪切体,在保证其抗凋亡功能缺失的情况下尽量保存长度以提高免疫原性。 Survivin在体内是以二聚体形式起作用的,它的N-端第6、第7和第10三个氨基酸是形成二聚体的关键氨基酸;survivin(5-14)是HLA-A2的特异性抗原表位。基于这两点设计了第一个剪切体Surv△N7(即切去其N-端7个氨基酸)。Survivin的第34位氨基酸Thr是CDC2/cyclinB1特异磷酸化位点,而且研究表明SurvT34A已经缺失了抗凋亡功能,因此如果从Thr34切除,应该可能缺失抗凋亡的功能,又因为survivin的第38位氨基酸的密码子是ATG,所以设计的第二个剪切体为SurvAN37(即切去其N-端37个氨基酸),预期Surv△N7和Surv△N37将失去抗凋亡活性。 将Surv△N7和Surv△N37构建到真核表达载体(VR1012)中,同时,将全长survivin和SurvT34A构建到VR1012载体中作为对照。上述质粒在动物细胞中表达后用几种方法检测Surv△N7和Surv△N37的抗凋亡活性。实验结果表明Surv△N7和Surv△N37像SurvT34A一样,缺失了抗凋亡的能力。暗示Surv△N7和Surv△N37可以作为设计疫苗的候选蛋白质,本论文的实验数据为
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