前言近年来肿瘤发病有年轻化趋势。随着各种诊疗技术的不断发展,女性癌症患者的生存率已明显提高。但放化疗在极大程度缓解癌症病情的基础上,也对卵巢组织造成严重的不可逆损伤,导致卵巢早衰。针对年轻患者,肿瘤治疗既要提高生存率又要重视其生活质量,保存其卵巢功能。冻存卵巢组织移植为保存年轻癌症患者的生殖内分泌功能提供了一种值得期待的选择方式,这一研究领域在近年来逐渐受到关注,也取得了一些可喜的成果。冻存卵巢移植过程影响因素众多,近年来研究表明,褪黑素(melatonin, MT)可能通过抗氧化损伤和促进卵泡发育等方面影响移植卵巢的功能。深入研究褪黑素在冻存卵巢移植过程中的作用和影响机制,对于优化卵巢移植技术程序,提高卵巢移植的成功率,更好的保存年轻患者生殖内分泌功能具有一定的意义。本课题在性成熟SD大鼠冻存卵巢组织自体异位移植过程中给予褪黑素,通过抗氧化酶测定以及组织切片卵泡计数了解褪黑素的不同给予时机对卵巢组织的短期影响。通过阴道涂片、性激素测定以及组织切片卵泡计数来了解褪黑素对不同移植部位的卵巢组织的中长期影响。旨为提高移植卵巢组织质量,优化卵巢移植程序提供理论依据。第一部分褪黑素给予时机对冻存移植卵巢组织的短期影响目的：褪黑素的不同给予时机对冻存自体移植卵巢组织抗氧化能力及卵泡剩余的短期影响。方法：将性成熟SD大鼠根据褪黑素的不同给予时机随机分为对照组、冻存前组、移植后组和冻存前+移植后组,分别给予褪黑素20mg/kg×2天或等量生理盐水腹腔注射,通过检测移植48小时后的卵巢组织的SOD活力、GSH-PX活力以及MDA含量,判断褪黑素对冻存移植卵巢组织抗氧化能力的影响。通过组织连续切片HE染色光镜下观察卵泡计数及分类判断褪黑素对移植卵巢组织的组织结构和卵泡剩余的影响。结果：冻存前组及冻存前+移植后组的卵巢组织GSH-PX活力明显高于对照组(P<0.05),冻存前组卵巢组织MDA含量明显低于对照组(P<0.05),SOD活力在各组间无显著差异。卵巢组织冻融后卵泡数量下降,自体移植48小时后卵泡数量进一步下降,各级卵泡构成比在组间无明显差异。冻融及缺血缺氧损伤对窦状卵泡影响更大。结论：褪黑素可以提高大鼠冻存自体移植卵巢组织的抗氧化能力,但对短期内卵泡剩余无明显影响。在冻存前或冻存前+移植后给予褪黑素可起到相应的保护作用。第二部分褪黑素对不同异位移植部位的冻存卵巢组织的中长期影响目的：研究褪黑素对肾被膜下、腿部肌肉以及颈部皮下自体移植的冻存卵巢组织结构和生殖内分泌功能的中长期影响。方法：将性成熟SD大鼠根据不同的自体移植部位随机分为肾被膜下组、腿部肌肉组及颈部皮下组,每一大组根据是否给予褪黑素分为褪黑素组和对照组,通过阴道涂片及血清E2测定判断卵巢组织生殖内分泌功能恢复情况,通过组织连续切片HE染色光镜下卵泡分类及计数判定卵泡剩余及发育情况。结果：除颈部皮下组2只大鼠外,其余大鼠在冻存卵巢组织自体移植后7-9天均可恢复动情周期,血清E2水平与移植前无明显差异。褪黑素组与对照组血清E2水平无明显差异。移植后30天各部位的卵巢组织卵泡构成比与冻存前相比均有显著差异(P<0.05),卵泡逐渐发育成熟。肾被膜下组中,褪黑素组与对照组相比卵泡构成比有显著差异(P<0.05)。各组间的卵泡计数无显著差异。结论：大鼠冻存卵巢组织自体异位移植可基本维持生殖内分泌功能。肾被膜下和腿部肌肉与颈部皮下相比更适宜作为异位移植部位。褪黑素对血清E2水平无明显影响,褪黑素对移植至肾被膜下的卵巢组织具有促进卵泡发育成熟的作用。总结1.大鼠卵巢组织能够耐受冻融过程,在自体异位移植后卵泡可生长发育,并具有生殖内分泌功能。肾被膜下和腿部肌肉与颈部皮下相比,移植成功率更高,更适宜作为异位移植部位。2.褪黑素可以提高大鼠冻存移植卵巢组织的抗氧化能力,但对短期内卵泡剩余无明显影响。在冻存前或冻存前+移植后给予褪黑素可起到相应的保护作用,冻存前给药作用更佳。3.褪黑素对于肾被膜下卵巢组织具有促进卵泡发育成熟的作用。