本研究从影响肉牛骨骼生长发育的 BMP 基因出发,利用 Genbank 中其他物种的序列信息,通过序列比对、分析和 PCR-RACE 方法,对尚未报道的牛 BMP-4 基因序列进行扩增、克隆及测序。方法:1、在 Genbank 中查找人、小鼠和羊的 BMP-4 基因序列,运用 DNAStar 软件对这些序列进行同源性分析。依据同源性较高外显子区域设计引物。首先提取牛血液基因组 DNA,采用 PCR 技术扩增牛 BMP-4 的部分序列,将此片段重组到 PMD18-T 载体中,双酶切和 PCR 鉴定后测序,获得长为 306bp 的牛BMP-4 部分外显子序列。2、通过已获得的 BMP-4 序列设计 PCR-RACE 的上游特异引物,从牛软骨中提取总 RNA,用 Oligo(dT)15 Adaptor primer 和所设计的上游特异引物进行 PCR-RACE,通过克隆、测序后获得一条包括 3′末端非翻译区和大部分编码区序列,并与已获得外显子序列拼接得到长度为 1306bp 的基因序列。通过序列分析,发现 3′端氨基酸序列含有 BMP 家族固有特定位置的 7 个半胱氨酸,并与其他物种包括人、羊、小鼠、大鼠、狗和鸡的核苷酸序列同源比对,发现它们的同源性分别为 90.2%、94.2%、90.9%、90.4%、85.4% 和 73.6%,证实克隆的序列为牛 BMP-4序列,同时进行了氨基酸序列的预测和分析,克隆片段编码 389 个氨基酸,3′末端非翻译区长为 121bp,与人、羊、鼠、狗和鸡的同源性很高,为克隆其他 BMP 家族成员提供了依据。此序列已登陆 Genbank,登陆号:AY854957。