【摘 要】
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目的:miRNA在缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)神经元损伤和修复中起着重要的作用。本文目的是利用缺糖缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells:BMECs)模型探讨抑制miRNA-143-3p表达对OGD处理的BMECs的影响。方法:BMECs经过不同
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目的:miRNA在缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)神经元损伤和修复中起着重要的作用。本文目的是利用缺糖缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells:BMECs)模型探讨抑制miRNA-143-3p表达对OGD处理的BMECs的影响。方法:BMECs经过不同时间OGD处理后,qPCR检测细胞内miRNA-143-3p表达差异。分离培养雄性SD大鼠原代BMECs(primary BMECs:p BMECs),分为四组:空白对照组(p BMEC)、阳性对照组(p BMEC-OGD)、无义抑制剂(None senses product inhibitor,NC-inhibitor)对照组和miRNA-143-3p抑制剂(miRNA-143-3p inhibitor)组。空白对照组正常培养,p BMEC-OGD组只进行OGD处理,NC-inhibitor对照组、miRNA-143-3p inhibitor组则分别转染NC-inhibitor和miRNA-143-3p inhibitor后,再进行OGD处理。qPCR检测细胞内miRNA-143-3p表达证明抑制剂作用。之后通过MTT、Transwell、流式细胞和成管实验观察抑制miRNA-143-3p对OGD处理的p BMEC生物学特性的影响。结果:经过OGD处理的BMECs,miRNA-143-3p的表达显著增加,并且有明显的时间依赖性。OGD处理6h内,miRNA-143-3p表达量增加迅速,之后增加减缓,因此选择OGD处理6h作为后续研究时间点。OGD处理转染miRNA-143-3p inhibitor和NC-inhibitor的p BMECs,qPCR结果显示miRNA-143-3p inhibitor组miRNA表达量明显降低,几乎达空白对照的水平(p>0.05),同时明显低于p BMEC-OGD组和NC inhibitor组(p<0.05)。MTT和Transwell实验结果表明:与p BMEC-OGD组和NC-inhibitor组相比,miRNA-143-3p inhibitor组的细胞增殖能力和迁移能力增加(p<0.05),抑制miRNA-143-3p表达能够缓解OGD引起的细胞的增殖和迁移能力降低。流式细胞实验结果表明:与p BMEC-OGD组和NC-inhibitor组相比,miRNA-143-3p inhibitor组的细胞凋亡比例降低(p<0.05)。转染miRNA-143-3p inhibitor后,进入G2-S1期的细胞比例增多,G1期细胞减少,说明抑制miRNA-143-3p表达能够缓解OGD诱导的细胞凋亡,部分消除OGD诱导的细胞周期阻滞。另外,成管实验的结果表明:与p BMEC-OGD组和NC-inhibitor组相比,miRNA-143-3p inhibitor组中血管数量显著增加(P<0.01),说明抑制miRNA-143-3p表达显著改善OGD诱导的脑微血管内皮细胞血管生成能力降低。结论:抑制miR-143-3p表达可以明显缓解OGD对脑微血管内皮细胞的损伤,起到细胞保护作用。抑制miR-143-3p表达可能是缺血性脑卒中潜在的治疗靶点。
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