目的:本课题以急性海马脑片神经元作为研究对象,观察睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)和睾酮-牛血清白蛋白(T-BSA)对急性海马脑片神经元树突棘密度及突触蛋白SYN和PSD95的快速作用,探讨雄激素非基因组效应对海马神经元突触形态可塑性的影响。方法:1急性海马脑片的制备和神经元活性鉴定。SD大鼠麻醉后,断头取脑,置于人工脑脊液(ACSF)中。剥离并修整海马组织,振动切片机制备300μm的冠状海马脑片,置于ACSF中孵育。每只大鼠制备5片急性海马脑片,分别在0 min、15 min、30 min、60 min和120 min 5个时间点转移到含有细胞核染料DAPI和PI的ACSF中孵育,清洗多余荧光染料后,裱片于载玻片上,激光共聚焦显微镜观察海马神经元的形态,通过荧光染料的染色情况鉴定急性脑片海马神经元的活性。2雄激素对急性海马脑片神经元树突棘密度的快速影响。制备急性海马脑片。随机分为对照组(CON组)、T组、DHT组和T-BSA组。根据参考文献和预实验结果,T组和DHT组药物作用浓度为10 n M,T-BSA组为0.36 n M,CON组给予等量的二甲基亚砜。根据参考文献和预实验结果,药物作用时间为1 h。给药结束后,4%多聚甲醛固定,进行Golgi-Cox染色。激光共聚焦显微镜对海马CA1区神经元顶树突第2级或第3级树突的树突棘成像,通过Imaris软件计算所选树突上的树突棘密度,进行各组树突棘密度间的比较。3雄激素对急性海马脑片神经元突触蛋白SYN和PSD95的快速影响。制备急性海马脑片。实验分组以及药物作用浓度和作用时间同上一部分。给药结束后,4%多聚甲醛固定,30%蔗糖溶液脱水处理,包埋后进行冰冻切片,取每个脑片固定表面深度的三张切片,切片厚度10μm,裱片于载玻片上。应用免疫荧光组织化学染色方法,激光共聚焦显微镜对海马CA1区突触蛋白SYN和PSD95进行观察并比较各组平均相对荧光强度。结果:1急性海马脑片的制备和神经元活性鉴定的结果。制备的急性海马脑片肉眼观察为淡黄色,舒展平整。选择表层下层面的细胞,激光共聚焦显微镜观察到细胞边界清晰且折光性好,立体感及层次感较强,细胞核和颗粒均不可见。在细胞核染料DAPI和PI双重染色显示,急性海马脑片神经元在0 min、15 min、30 min、60 min、120 min 5个时间点,活细胞百分比分别为79.92±1.66%、80.06±0.94%、80.60±0.97%、79.48±0.92%和79.87±0.88%,各组之间神经元活性无统计学差异(P>0.05)。2雄激素对急性海马脑片神经元树突棘密度快速影响的结果。Golgi-Cox染色结果显示:与CON组(2.10±0.15 thorns/μm)相比,T组(2.89±0.19 thorns/μm)、DHT组(3.01±0.16 thorns/μm)和T-BSA组(2.90±0.22 thorns/μm)的树突棘密度均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);T组、DHT组和T-BSA组之间树突棘密度无统计学差异(P>0.05)。3雄激素对急性海马脑片神经元突触蛋白SYN和PSD95快速影响的结果。SYN免疫荧光组织化学染色结果显示:与CON组(42.26±3.66)相比,T组(54.22±4.10)、DHT组(56.01±4.90)和T-BSA组(55.34±6.12)的平均相对荧光强度均有明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);T组、DHT组和T-BSA组之间SYN平均相对荧光强度无统计学差异(P>0.05)。PSD95免疫荧光组织化学染色结果显示:与CON组(70.26±4.55)相比,T组(84.12±5.34)、DHT组(83.98±3.37)和T-BSA组(85.84±4.45)的平均相对荧光强度均有明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);T组、DHT组和T-BSA组之间PSD95平均相对荧光强度无统计学差异(P>0.05)。结论:1实验条件下制备的急性海马脑片神经元在2 h内细胞活性稳定良好。2雄激素在短时间内快速增加了急性海马脑片神经元树突棘密度。3雄激素在短时间内快速增加了急性海马脑片神经元突触蛋白SYN和PSD95的表达。