侵染一串红的蚕豆萎蔫病毒2号的分子鉴定

来源 :石河子大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lhnyzz520
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【目的】一串红(Salvia splendens)观赏价值高,是城市和园林中普遍栽培的草本花卉。在石河子观察到一些叶片花叶、植株矮化、花序减少、变小,提前枯死的一串红,降低观赏价值。本研究论文对病原进行检测鉴定,明确其病原病毒及分子特性,为进一步控制该病害提供理论基础。【方法】采集表现花叶的一串红样品,在防虫温室中接种测试寄主观察症状表现和提取dsRNA初步确定病毒类型;以dsRNA/RNA为模板,合成特异性引物进行RT-PCR、克隆、序列测定和分析,明确其分子特性。【结果】在防虫温室摩擦接种3科5种植物,在心叶烟、三生烟、假酸浆、鸡冠花、蚕豆产生明显的局部或系统性症状,经过筛选获得S4分离物。提取S4分离物的dsRNA,得到大小约4700bp和6300bp的片段,以此dsRNA为模板,用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物进行RT-PCR,扩增得到一条约400bp片段,序列测定片段长为391nts,NCBI中经blast比对,与蚕豆萎蔫病毒2号(Bean broad wilt virus2,BBWV2)的相似性为78%100%,表明S4分离物为BBWV2。设计合成特异性引物,以S4分离物的总RNA为模板分段进行RT-PCR,PCR产物经回收、克隆和测序,得到S4分离物RNA1基因组全序列为5957nt(不包括poly A),编码一个大的开放阅读框(Open reading frame,ORF);序列相似性结果表明,S4分离物与已报道BBWV2的RNA1序列相似性在78.4%100.0%,与来自同一地区辣椒分离物XJP1-1序列同源性为100%。基因组RNA2大小为3618个核苷酸(不包括poly A),同样编码一个大的开放阅读框(ORF),与BBWV2的RNA2序列相似性在80.4%93.0%,其中与中国新疆的辣椒分离物XJP1-1同源性最高,达93.0%,而与来自同一地区加工番茄分离物XJ14-3a的同源性最低,仅为80.4%。【结论】通过本论文的研究,初步明确了石河子地区一串红花叶病毒病是由BBWV2侵染所致,并明确了其分子特性,这是首次系统的对BBWV2侵染一串红进行的研究。
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