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目的: 观察胃癌细胞株BGC823中survivin和p53基因的表达情况;研究p53基因对survivin基因表达的影响,探讨survivin与p53之间可能的作用机制;构建pcDNA3.0-survivin启动子质粒。
方法:从胃癌细胞株BGC823中,用RT-PCR的方法观察胃癌细胞BGC823中survivin基因和p53基因的表达;用Western blot方法观察survivin和p53蛋白的表达情况;用表达野生型p53的质粒pcDNA3.0-rp53转染BGC823细胞株,用空白pcDNA3.0作对照,细胞培养8、16、24小时,分别采用real-timePCR和Western blot的方法检测不同时间点survivin的mRNA和蛋白表达情况;应用PCR的方法获得survivin启动子序列,构建含有该启动子的质粒。
结论:胃癌细胞BGC823表达survivin基因和p53基因;在胃癌细胞株BGC823中,野生型p53能够在转染后16h抑制survivin基因的表达,在转染后24h,其抑制作用进一步增强。构建了正确的含survivin启动子功能元件的质粒:pcDNA3.0-survivin。