C/EBPβ介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaojiaoechou
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目的:检测正常足月妊娠及子痫前期孕妇胎盘组织C/EBPβ和P-catenin蛋白的定位及表达;采用缺氧/复氧模型体外模拟胎盘氧化应激损伤,研究C/EBPβ和β-catenin在调控人滋养细胞迁移和侵袭中的作用;探讨C/EBPβ是否介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的作用,为后者的早期诊断和治疗提供借鉴。方法:(1)选择2013年3月至2014年3月在我校附一院产科住院分娩的22例子痫前期孕妇为研究对象,另以20例正常足月妊娠孕妇设对照组,收集两组孕妇胎盘组织。免疫组化SP法定位各组胎盘组织中C/EBPβ和β-catenin蛋白,蛋白印迹法(Western Blotting, WB)检测各组胎盘组织中C/EBPp和β-catenin蛋白的表达水平。(2)通过shRNA慢病毒转染质粒干扰早孕期绒毛外植体和HTR8/SVneo细胞株的C/EBPβ基因表达,通过氯化锂激活β-catenin信号分子;同时,对早孕期绒毛组织和HTR8/SVneo细胞株进行缺氧/复氧培养。Transwell侵袭实验检测阻断C/EBPβ和激活β-catenin对HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响。绒毛外植体培养实验评估阻断C/EBPβ和激活β-catenin对绒毛外滋养细胞外生性迁移的影响。(3)WB法检测各组HTR8/SVneo细胞中C/EBPβ、β-catenin、MMPs和TIMPs蛋白的表达情况,观察C/EBPβ→β-catenin→MMPs、TIMPs在氧化应激中的变化;同时,检测各组HTR8/SVneo细胞内氧化应激指标ROS蓄积量;进一步明确C/EBPβ介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的作用。结果:(1)正常足月妊娠组及子痫前期组胎盘组织中均有C/EBPβ和β-catenin蛋白表达。C/EBPβ主要定位于合体滋养细胞的细胞核。β-catenin主要定位于合体滋养细胞细胞核,在细胞质中亦有少量表达。子痫前期组胎盘组织中C/EBPβ、β-catenin蛋白表达水平分别为(0.47±0.01)、(0.27±0.05),分别与对照组(0.25±0.02)、(0.55±0.07)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)缺氧/复氧可导致绒毛外滋养细胞侵袭迁移力下降,而敲减C/EBPβ表达或激活β-catenin信号分子可以改善受损的绒毛外滋养细胞侵袭迁移能力。(3)缺氧/复氧可导致HTR8/SVneo细胞中C/EBPβ表达上调,降低β-catenin表达及抑制MMP-2/9、活化TIMP-1/2;敲减C/EBPβ表达,可上调β-catenin表达,同时活化MMP-2/9和抑制TIMP-1/2;激活P-catenin信号分子,对C/EBPβ无影响,但仍可活化MMP-2/9和抑制TIMP-1/2。(4)缺氧/复氧可增加细胞内氧化应激损伤,敲减C/EBPβ的表达或P-catenin激活可以有效抑制ROS的蓄积。结论:在子痫前期胎盘组织中,C/EBPβ表达水平升高可通过调控Wnt/β-catenin信号通路而影响MMP-2/9及TIMP-1/2的活性水平,减弱滋养细胞的侵袭力,从而调控子痫前期的氧化应激发病机制。
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