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miRNA是长度约为22个核苷酸的内源性非编码RNA分子,在基因的表达调控中起重要作用。现已表明,miRNA介导着诸多生理、病理以及发育过程。斑马鱼作为脊椎动物中的模式生物,在发育生物学的研究中具有诸多优势,例如个体小,高繁殖率,生长周期短,已破译的全基因组序列以及完善的胚胎和遗传学操作技术等,这些优势使得斑马鱼成为研究miRNA的功能、胚胎发育机制和生物进化方面的实验材料。我们实验室在早期研究工作中发现miR-202是let-7家族成员,在脊椎动物物种间具有高度保守性,但是在脊索动物门文昌鱼的基因组中却未发现该miRNA,预示着miR-202可能在脊椎动物中具有特殊功能。尽管有报道miR-202在性腺中特异性表达,但miR-202在斑马鱼胚胎发育过程中的调控功能却尚未揭示。因此,我们以脊椎动物模型—斑马鱼为实验材料,以期了解miR-202在斑马鱼早期胚胎发育过程中的调控功能,进而揭示其在生命发生及生物进化方面的重要意义。首先利用q RT-PCR技术和整体原位杂交技术(WISH)探究miR-202在斑马鱼早期胚胎发育过程中的时空表达。结果发现,miR-202在斑马鱼胚胎0 hpf-72 hpf发育阶段持续性表达。其次,采用反义核苷酸阻断miR-202的表达,发现斑马鱼胚胎发育停滞在4 hpf左右,并且最终死亡。将miR-202的反义核苷酸与前体共注射于斑马鱼胚胎能够部分挽救由敲降miR-202所引起的胚胎发育异常。最后,利用前沿的CRISPR/Cas9基因编辑技术对斑马鱼miR-202编码序列进行片段删除。结果发现F1代杂合子斑马鱼与野生型对照组斑马鱼胚胎发育过程无明显差异。但是miR-202敲除的F2代纯合子斑马鱼胚胎在受精后5 hpf-24 hpf内相继死亡。本实验初步证实了miR-202在斑马鱼早期胚胎发育过程中的至关重要的调控作用,而其分子调控机制有待进一步的深入研究。