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该论文利用载体呈现技术和重叠延伸反应(PCR)构建K88ac-STII融合基因,并在pET-28a原核表达载体中进行表达.根据K88ac结构基因设计一对引物,并使引物两端含有NcoⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点.通过PCR技术获得K88ac结构基因846bp,用限制性内切酶BsaJI将846bp的片段酶切为536bp和310bp的两个小片段,采用重叠延伸PCR技术,将STII的部分结构基因嵌入K88ac结构基因高度可变区域,克隆于载体pBS-T,得到阳性克隆,经过序列测序,表明已成功构建了K88ac-STII融合基因,命名为T-K88ac-STII.用NcoI和XhoI限制性内切酶分别酶切重组质粒和表达载体pET-28a,分别回收894bp和5.2Kb片段,用T4 DNA连接酶将回收片段连接,构建原核表达重组质粒pET-K88ac-STII,将此重组质粒转化到DH10B,菌落PCR鉴定后,进行大量培养,提取重组质粒pET-K88ac-STII,再将此质粒转入BL21表达菌,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).结果显示,在25-35Kd之间出现一条特异条带,且表达量高.回收菌体蛋白沉淀,进行琼扩实验,结果表明K88ac蛋白在工程菌BL21中得到了表达.进一步证实了K88ac菌毛基因高变区上游可以作为外源片段的插入位点而不影响K88ac菌毛蛋白的活性.为仔猪细菌性腹泻基因工程苗的研制提供了新的思路.