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第一部分PGG对抗MPP+孵育所致PC12细胞的氧化应激反应摘要目的：研究1,2,3,4,6-五-氧位-没食子酰基-β-右旋葡萄糖(1,2,3,4, 6-penta-O-galloy-β-D-glucose, PGG)诱导PC12细胞中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO-1)的产生及HO-1对抗MPP+孵育PC12所产生的氧化应激反应。方法：用不同浓度的(0、5、20、50、80、100μM) PGG处理经过神经营养因子(nerve growth factor—NGF)孵育一周的PC12细胞10小时,以及用30μM的PGG处理经过NGF孵育过一周的PC12不同时间。观察HO-1mRNA变化时所用的时间点为0、3、6、12、18、24h,观察HO-1蛋白变化时所用的时间点为-0、5、10、15、20、30h；通过免疫印迹法(Western blotting)、RT-PCR、活性氧试剂盒检测以及MTT方法观察PC12细胞中HO-1 mRNA和蛋白的合成与PGG作用浓度与作用时间的关系,PC12细胞中HO-1活力与PGG作用浓度与作用时间的关系,以及PGG对抗由于孵育MPP+所致的对PC12细胞产生的氧化应激反应。结果：PGG能促进PC12细胞中HO-1mRNA和蛋白的合成,HO-1mRNA和蛋白的合成呈浓度和时间依赖性,在PGG作用10h下,20gM的PGG便能增加HO-1mRNA和蛋白的合成,50μMPGG作用下HO-1mRNA和蛋白的合成呈现高峰,之后HO-1mRNA和蛋白合成量下降,但仍高于20μM PGG作用时HO-1mRNA和蛋白的合成量；在30μMPGG作用下,PC12细胞中HO-1mRNA和蛋白的合成均呈时间依赖性,HO-1mRNA在6h时合成增多,12h达高峰,HO-1蛋白在10h时合成增多,15时达高峰,高峰后的时间点HO-1mRNA合成量仍大于6h点时HO-1mRNA合成量,蛋白的合成量仍大于10h点时的HO-1的蛋白量。HO-1的活性变化也呈现浓度与时间依赖性,其趋势与HO-1蛋白表达的浓度与时间依赖性一致。定量与定性上均观察到PGG抑制活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的产生。结论：PGG促进PC12细胞中HO-1mRNA和蛋白的合成,在PGG的作用下,PC12细胞中HO-1mRNA和蛋白的合成呈现浓度和时间依赖性,HO-1的活力变化也呈现浓度和时间依赖性。PGG可通过诱导HO-1的产生对抗MPP+对PC12产生的氧化应激反应。第二部分PGG对ERKl/2信号通路诱导HO-1的影响目的：本部分研究细胞外信号调节酶1/2(extracellular singnal-regulated kinase, ERK1/2)信号通路在1,2,3,4,6-五-氧位-没食子酰基(1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose,PGG)诱导PC12细胞中HO-1产生中的作用。方法：将细胞分成不同的组别,用PGG、MPP+,PD98059以及ZnPP处理PC12细胞,通过Western blotting和MTT方法,观察药物处理前后PC12细胞中ERK1/2磷酸化程度,Nrf2核转位、HO-1的表达以及细胞活力的变化。结果：PGG可促进PC12细胞中ERK1/2磷酸化增高,增高的ERK1/2磷酸化可促进PC12细胞细胞浆中的Nrf2向细胞核转位,从而促进了HO-1的合成增多,达到保护MPP+所损害的PC12细胞的作用；PD98059可通过抑制ERK1/2磷酸化而部分的抑制PC12细胞的中HO-1的表达,从而部分抑制了PGG对MPP+所损伤的PC12的保护作用。结论：ERK1/2信号通路在PGG保护MPP+损害PC12细胞中发挥重要的作用。第三部分PGG对PI3K/AKT信号通路诱导HO-1的影响目的：本部分研究磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)／蛋白激酶AKT(phosphatidylinositol-3 kinase/protein AKT, PI3K/AKT)信号通路在PGG促进HO-1表达中的作用。方法：将细胞分成不同的组别,用PGG、MPP+, LY294002以及ZnPP处理PC12细胞,通过Western blotting和MTT方法,观察PC12细胞中AKT磷酸化程度、Nrf2核转位程度、HO-1的表达以及细胞活力的变化。结果：PGG可促进PC12细胞中AKT磷酸化增高,增高的AKT磷酸化可促进PC12细胞胞浆中的Nrf2向细胞核转位,从而促进了HO-1的合成增多,达到保护MPP+所损害的PC12细胞的作用；LY294002可通过抑制AKT磷酸化而部分的抑制PC12细胞的中HO-1的表达,从而部分抑制了PGG对MPP+所损伤的PC12的保护作用。并且LY294002与PD98059联合作用能完全阻断Nrf2的核转位与HO-1的表达,但无法完全消除PGG对与MPP+孵育PC12细胞的保护作用。结论：PI3K/AKT信号通路在PGG保护MPP+损害PC12细胞中发挥重要的作用。