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目的:1、评价降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是否参与缺血心肌的保护作用,通过观察其对再灌注后心脏功能和心脏梗死面积的影响;2、通过对培养的心肌细胞进行药物干预,进一步探讨mito-KATP在CGRP改善心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。方法:第一章:CGRP对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及心肌梗死面积的影响采用体重为250-300g的健康雄性SD大鼠。建立Langendorff离体心脏缺血再灌注实验模型,实验研究分二部分:第一部分在大鼠离体心脏缺血再灌注前分别给予CGRP、CGRP+CGRP8-37处理,通过观察心功能各项指标(左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP),左室舒张末期压(left ventricular end-diastrolic pressure,LVEDP),左室主动收缩压(left ventricular developed pressure,LVDP=LVSP-LVEDP),心率(heart rate,HR),舒张时心肌最大变化速率(-dp/dtmax),收缩时心肌最大变化速率(+dp/dtmax))评估CGRP对心脏的保护作用。第二部分收集第一部分各组离体心脏,进行TTC染色,根据对染色结果的观察,分析外源性CGRP对缺血/再灌后心肌梗死面积的影响;第二章:CGRP对缺氧复氧乳鼠心肌细胞胞浆cyt C变化的影响第一部分体外培养和鉴定新生乳鼠心肌细胞。选用出生1-3d SD乳鼠建立心肌细胞体外培养模型;采用免疫细胞化学SABC染色方法进行鉴定心肌细胞。第二部分观察不同药物处理下,乳鼠心肌细胞胞浆cyt C浓度的变化。取24孔心肌细胞,将其随机分为8组(n=3孔):空白对照组;A/R组;CGRP+A/R组(10-8mol/L);CGRP+CGRP8-37+A/R组(1umol/L);5-HD+CGRP+A/R组(500umol/L);H-89+CGRP+A/R组(1umol/L);chelerythine+CGRP+A/R组(2umol/L);DZ+A/R组(100umol/L)。每组复氧2h后选用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胞浆中cyt C的浓度。结果:1、CGRP对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及心肌梗死面积的影响。1.1心脏功能心脏灌流呈稳定状态时,各组间心功能改变无统计学意义;与稳定状态的基础值相比,各组再灌注期间HR、±d P/dtmax、LVSP、LVDP逐渐下降(P<0.05),而LVEDP显著升高(P<0.05)。与I/R组相比,CGRP组再灌注期间LVSP、HR、±d P/dtmax、LVDP增加(P<0.05),而LVEDP显著下降(P<0.05)。CGRP+CGRP8-37+I/R组与I/R组比较,各心功能指标均无统计学差异。1.2 CGRP对再灌后心肌梗死面积的影响:与I/R组相比,CGRP组的心肌梗死面积显著下降(P<0.01),与CGRP组相比,CGRP+CGRP8-37+I/R组的心肌梗死面积显著增加。2、CGRP对体外培养乳鼠心肌细胞进行缺氧/复氧后cyt C的影响2.1成功建立乳鼠心肌细胞体外培养模型。2.2成功建立心肌细胞缺氧/复氧模型,心肌细胞缺氧/复氧后检测其胞浆内细胞色素C的含量显著增高。2.3与N组比较,除外CGRP组,其余各组胞浆cyt C的释放明显增加(P<0.01);与A/R组比较,CGRP组与DZ组cyt C的释放明显减少(P<0.01);与CGRP+A/R组比较,CGRP+CGRP8-37+A/R组、5-HD+CGRP+A/R组、chelerythine+CGRP+A/R组胞浆cyt C的释放量明显增加(P<0.01);与H-89+CGRP+A/R组比较,chelerythine+CGRP+A/R组胞浆cyt C的释放量明显增加(P<0.05)。结论:1.心肌缺血前,给予外源性CGRP预处理,能稳定心脏功能,减小心肌梗死面积。其拮抗剂能够拮抗上述作用。提示CGRP与其受体结合,通过某种途径产生心肌保护作用。2.CGRP发挥心肌保护作用可能与蛋白激酶C的激活和mito KATP通道开放有关,抑制线粒体途径的细胞凋亡。