关于老年性聋与噪声性聋相关机制的研究

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目的:1.研究129SV小鼠在不同年龄段外毛细胞prestin蛋白的表达,探讨外毛细胞在不同年龄段的功能变化,揭示外毛细胞功能变化在年龄相关性耳聋中的作用。2.研究中等强度带通噪声暴露对C57小鼠听力以及内外毛细胞的影响。方法:1.1对5W,26W,52W小鼠进行外毛细胞非线性膜电容记录,分析不同年龄段小鼠I-V曲线,Qmax,Clin,Vh,Qsp的差别。1.2对5W,26W,52W小鼠进行听性脑干反应测试,得到各组小鼠4k Hz,5k Hz,8k Hz,11k Hz,16k Hz,22k Hz,32k Hz的听力阈值,对不同年龄段小鼠的阈值进行对比分析。1.3根据测得的ABR数据,对5W,26W,52W小鼠的8k Hz频率进行ABR波幅分析,得到它们ABR I波的波幅与潜伏期并进行对比。1.4对5W,26W,52W小鼠进行内淋巴电位测试,分析不同年龄段小鼠内淋巴电位的差别。2.1.以98d B SPL,8-16k Hz的带通噪声对C57 BL/6雄性小鼠噪声暴露2小时。2.2.分别在噪声暴露前、噪声暴露后第一天及第十五天进行听觉脑干反应测试以观察噪声对小鼠听力造成的损伤及恢复情况。2.3.将非噪声小鼠设为对照组,噪声暴露后第15天的小鼠设为实验组,取对照组与实验组小鼠耳蜗基底膜进行免疫荧光染色,对内外毛细胞以及内毛细胞的带状突触进行计数。结果:1.外毛细胞非线性膜电容记录结果显示:在给予Ramp电压刺激时,相比于5周小鼠,26周龄小鼠非线性膜电容(Qmax)与电流最大值(Imax)显著下降,同时线性膜电容(Clin),电荷密度(Qsp),非线性膜电容的半激活电压(Vh)无显著性改变。相比于5周龄的小鼠,52周龄小鼠的外毛细胞Qmax,Clin,QSP,Imax均显著下降,同时Vh向去极化方向移动。2.ABR测试结果显示:与5W小鼠相比,26W小鼠并无显著阈值升高,也无ABR I波波幅潜伏期的显著变化,但是52W小鼠阈值全频升高,同时伴有ABR I波波幅的下降与潜伏期的延迟。3.噪声暴露后第十五天C57小鼠中高频阈值没有完全恢复。在22k Hz,实验组小鼠ABR I波波幅显著下降,潜伏期显著延长。免疫荧光染色结果显示噪声后外毛细胞在高频区域有显著丢失,内毛细胞带状突触在高频区域有显著丢失。结论:1.外毛细胞Prestin蛋白的丢失在老年性聋的发生发展中起重要作用。2.98d B带通噪声暴露会使C57 BL/6雄性小鼠产生轻度永久性阈移,噪声后基底膜受损区域主要集中在中高频区。相对于外毛细胞来说,噪声后内毛细胞突触结构与功能损伤的频率范围更加广泛。
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