茶树轮斑病病原菌的鉴定及其对3种杀菌剂的敏感性

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茶树(Camellia sinensis(L.)O.Ktze.)是我国重要的经济作物,种子可以榨油,其木可用于雕刻,叶子具有养生、延缓衰老等功效,是茶树上最具经济价值的部分。近年来,随着茶树种植范围的扩大,茶树病害的危害面积和危害程度均显著增加。其中,茶树轮斑病是茶树重要叶部病害之一,该病主要危害成叶,老叶及嫩梢,严重时导致茶树叶片大量脱落造成整株死亡,不仅降低了茶叶的产量,还严重影响茶叶品质。本研究从中国不同茶产区采集茶树轮斑病病样,分离获得茶轮斑菌,结合形态学特征、多位点序列分析和柯赫氏法则验证,对茶树轮斑菌进行鉴定,同时采用菌丝生长速率法测定了供试菌株对戊唑醇、苯醚甲环唑和多菌灵的敏感性。主要研究结果如下:1.茶树轮斑病病原菌的分离和形态学观察从福建、河南、湖南、四川、安徽、广东等茶叶产区采集具有典型茶树轮斑病症状的病叶,通过组织分离法分离、纯化病原菌,共获得病菌分离物54株。根据分离菌株在PDA上的菌落形态和分生孢子特征,将获得的菌株划分为6种类型。其中类型1(24株):菌丝奶白色呈绒毛状,层叠生长,具有沟纹;类型2(7株):菌丝纯白色呈毡状,具有同心圆环;类型3(9株):菌丝纯白色呈棉絮状、纹状生长;类型4(7株):菌丝纯白色,散射生长,菌落形状呈花瓣状;类型5(3株):菌丝奶白色呈棉絮状,菌落正面呈沟纹状同心圆环;类型6(4株):菌丝纯白色,散射生长,菌落呈齿轮状。类型1-类型4的菌株分生孢子为5细胞,均为纺锤形、直或稍弯曲、中间三个细胞褐色,类型5与类型6的菌株分生孢子为5细胞,纺锤形,直或稍弯曲,中间三色孢的第一、二细胞褐色,第三细胞淡黄色。2.茶树轮斑病病原菌的分子鉴定在每种类型中选择代表菌株16株进一步进行分子鉴定,采用ITS、TUB和TEF基因的引物对目的片段进行PCR扩增、测序和序列分析,并利用多位点序列构建系统发育树。结果表明,测试的代表性菌株包括4个不同种,分别为Pseudopestalotiopsis.camelliae-sinensis,Pseudopestalotiopsis.chinensis,Neopestalotiopsis.clavispora和Neopestalotiopsis.mesopotamica,其中Ps.camelliae-sinensis的分离频率较高。3.致病性测定采用针刺法测试代表菌株在‘舒茶早’离体枝条叶片上的致病性。对于产孢的菌株,配置10~7个/m L的分生孢子悬浮液进行致病性测定。结果显示,5株Ps.camelliae-sinensis菌株在叶片上均具有致病性;在测试的5株Ps.chinensis菌株中,4株菌株在叶片上具有致病性,菌株FMZ5不能引起‘舒茶早’叶片发病。对于不产孢的3株菌株(CCY51、CCY31和Y823),采用菌丝块接种法进行致病性测定,结果发现2株菌株CCY51和CCY31具有致病性。4.茶树轮斑病菌对3种杀菌剂的敏感性本研究选取了11株代表性菌株,分别测试了茶树轮斑病菌对3种杀菌剂的敏感性。结果发现,供试菌株对苯醚甲环唑的敏感性很高,EC50值为0.0350-0.2675μg/m L,其次是多菌灵,EC50值为0.1046-0.1647μg/m L,对戊唑醇的敏感性最差,EC50值为0.4662-1.5826μg/m L。
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