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成熟的红血细胞来源于骨髓,它的主要功能就是结合和运输氧气到全身各个组织和器官。红细胞调节氧气运输,保护血红蛋白免受氧化损伤,并保持细胞的渗透环境。ATP是红细胞维持细胞功能的重要能源,而糖酵解是红细胞获得ATP的唯一的能量代谢途径。目前,检测细胞糖酵解方法存在一定的局限,大多不能够在活细胞状态下实时检测。细胞外流量(Extracellular Flux,XF)技术即细胞能量代谢实时检测技术在这方面具有优势,它能够实时动态监测细胞代谢状态,它已经被应用于多种有核细胞和血小板的能量代谢检测上。由于红细胞独特的生理和代谢特点,它没有细胞核、线粒体和其他细胞器,而且在细胞形态和大小上也不同于其他细胞,所以XF技术应用到红细胞中的检测条件可能跟有核细胞的不一样,所以,对于XF技术在红细胞上的应用具有一定的挑战性,并且探索针对红细胞的检测条件和检测指标是有必要的。在本研究中,我们探究和优化实验条件,研究XF技术分析和检测成熟红细胞能量代谢的应用。我们的研究发现,在实验前将4℃放置的血样放在37℃孵育能提高红细胞代谢活性。并且,对于悬浮的红细胞,使用Cell-Tak包被XF96细胞板使悬浮的红细胞黏附在板底部,可以提高葡萄糖反应性。我们探索不同的加药浓度对红细胞糖酵解代谢检测中胞外酸化率(ECAR)值的影响,发现40mM葡萄糖和400mM 2-脱氧葡萄糖(2-DG)是较为合适的条件。然后,我们将建立的实验方法应用到正常条件保存的全血中,对红细胞糖酵解代谢的变化进行检测。其中与新鲜血样中的红细胞相比,在保存第42天时,红细胞葡萄糖反应性和糖酵解能力分别下降到81.5%和78.2%。通过ATP含量变化的检测结果作为验证,说明了该方法具有一定的可行性。这些优化的参数为XF技术应用到红细胞糖酵解代谢效能检测上奠定了基础,并且有助于对已有的红细胞能量代谢检测方法进行补充。