本文对苦参凝集素(Sophora flavescens Lectin，SFL)的研究分为三个部分，第一部分为SFL的分离纯化及部分性质研究；第二部分为对SFL的结构与生物学活性的研究；第三部分为SFL的蛋白毒性的初步研究。 苦参根浸出液经硫酸铵沉淀，得SFL粗晶。再经DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-200 HR凝胶过滤纯化，可获得SFL纯品。经SDS-PAGE检测为单一蛋白染色带，Sephadex G-100凝胶过滤测得其分子量为32kD，SDS-PAGE测得其亚基分子量也为32kD，证明SFL分子只有一个亚基，SFL含有3.5％的中性糖，用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基，经等电聚焦测得其等电点为5.56。当SFL浓度为0.97μg／mL时就能凝集兔红细胞，无血型专一性，糖抑制实验表明，甘露糖为SFL的专一性抑制糖。 SFL的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示217 nm处的单一负峰，此时SFL分子中含有15.8％a-螺旋，48.3％β-折叠和35.9％无规卷曲，研究了不同温度、pH和不同脲浓度对SFL的CD谱和凝集兔红细胞活性的影响，结果表明在pH4.0或温度80℃以上或脲浓度2mol／L以上时，SFL完全失去凝血活性或仅有微弱活性，此时CD谱发生很大的变化，二级结构遭到严重破坏，对SFL的荧光光谱进行了研究，结果表明Trp残基对SFL的荧光强度贡献最大。经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰显示其中2个Trp残基位于分子表面，当这2个Trp残基被修饰后，SFL的凝血活性完全丧失，糖保护试验表明SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL，阻断NBS对SFL的修饰作用，说明色氨酸 为SFL凝血活性所必需并参与了其糖结合部位的组成．SFL随着NBS 的逐渐修饰，其内源荧光光谱发生相应变化，结果表明分子表面的2 个Trn残基处于分子的疏水袋中，而另一个Trn残基则埋藏于分子内＿部·荧光淬灭研究表明丙烯酚胺能淬灭87％色氨酸残基的荧光·琉基～修饰实验表明经对氯汞苯甲酸仔CMB）和 N－乙基）l＠丁烯二酚亚胺州EM） 修饰后，SFL的凝血活性不发生改变．用NEM作修饰剂测定了SFL的 可反应疏基数和总疏基数，结果显示SFL分子中不含琉基，即该蛋白 质分子不含半眺氨酸残基．通过帆八双向对角线洲S干AGE，发现 SFL 不含h硫键，进一步印证了SFL中不含半眯氨酸残基的结论．SFL分 子中的酪氨酸残基分别经 N－乙酚咪哩（N）和对硝基苯磺酚氟 （NB SF）修饰后，其凝血活性不发生改变，说明Tyr残基与SFL的凝血 活性无关． 用MTT法测定了SFL对HeLa细胞的抑制率，结果表明SFL对HeLa 细胞的生长有显著的抑制作用，随着所加 SFL浓度的增大，细胞抑制 率增大．分别采用 Hoechst33342和 PI双染、琼脂糖凝胶电泳及流式 细胞光度术（FCM）的方法，研究了 SFL对 HeLa细胞凋亡的影响，结 果证实SFL可诱导HeLa细胞发生凋亡，但是诱导HeLa细胞凋亡的能 力不是很强，对浓度与作用时间有明显的依赖关系．当作用60 小时 以后，开始出现大量坏死细胞．可见，SFL对HeLa细胞的作用不仅是 诱导其发生凋亡，同时也可直接杀灭HeLa细胞． 本文对SFL的分离纯化、理化性质、结构与生物学活性进行了 研究，对SFL的细胞毒性作了初步的探索，为深入研究SFL的分子结 构与生物学活性的关系及其对肿瘤细胞毒性作用的机理打下了基 础．