【摘 要】
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研究背景:干细胞移植或组织工程皮肤成为修复严重皮肤缺损和难愈性创面的极具前景的研究方向。用于细胞移植或皮肤组织工程的细胞类型中,间充质干细胞（MSCs）包括脂肪间充质干细胞（ADSCs）与骨髓间充质干细胞（BMSCs）是研究最多的细胞类型,然而,由于MSCs具有一定的免疫原性,一般需自体取材移植运用,并且组织中的MSCs比例较少,因此MSCs均受细胞提取的组织来源的限制。胎儿组织来源的干细胞,可能
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研究背景:干细胞移植或组织工程皮肤成为修复严重皮肤缺损和难愈性创面的极具前景的研究方向。用于细胞移植或皮肤组织工程的细胞类型中,间充质干细胞（MSCs）包括脂肪间充质干细胞（ADSCs）与骨髓间充质干细胞（BMSCs）是研究最多的细胞类型,然而,由于MSCs具有一定的免疫原性,一般需自体取材移植运用,并且组织中的MSCs比例较少,因此MSCs均受细胞提取的组织来源的限制。胎儿组织来源的干细胞,可能具有更低的免疫原性和更强的增殖与分化能力,更有希望降低细胞的异体移植引起的免疫排斥风险而更适用于异体移植,同时在短期内可为细胞治疗提供充足的细胞来源,因而具有独特的优势与研究潜能。本实验提取人胎儿皮肤的干细胞,并将其命名为胎儿皮肤来源干细胞（Fetal Dermal-derived Stem Cells;FDSCs）,在裸鼠全层皮肤缺损创面中初步探究该细胞是否具有促进创面愈合的作用,并对该细胞进行鉴定和增殖与迁移力检测。从而为应用FDSCs治疗创面或将其做为组织工程皮肤的种子细胞提供实验研究证据。目的:1.通过裸鼠全层皮肤缺损创面模型研究FDSCs是否具有促进创面愈合的作用;2.通过细胞形态学、表面标志物的检测和诱导分化实验,对FDSCs进行鉴定,分析其是否是一种间充质干细胞。3.通过与创面治疗研究最多的脂肪间充质干细胞（ADSCs）和人皮肤成纤维细胞（HFF-1）进行增殖与迁移力的对比分析,研究FDSCs是否具有更好的创面修复功能。方法:1.在裸鼠背部作1.2cm全层皮肤缺损创面模型,实验组在缺损创缘沿皮下注射不同剂量FDSCs,对照组注射细胞培养基以及不做任何处理的空白对照,分别在0、3、7、10、14天时观察拍照,比较不同组创面愈合率,并取皮肤标本作病理检测分析。2.对三种细胞进行传代培养并观察细胞形态、采用流式细胞术检测三种细胞间充质干细胞（MSCs）相关表面标志物表达情况,进一步对三种细胞进行成脂、成骨分化诱导,从而鉴定FDSCs是否是一种间充质干细胞。3.采用CFSE染色法对FDSCs、ADSCs、HFF-1三种细胞同时进行染色,培养一段时间后通过荧光表达量计算三种细胞的相对增殖率;使用六孔培养板同时培养三种细胞,同时对三种细胞进行划痕实验比较三种细胞的迁移率。结果:1.与对照组相比,FDSCs注射组裸鼠创面在3、7、10、14天均表现出更高的创面愈合率,且中（5x10~6）、高（1x10~7）剂量细胞注射组创面愈合率增高明显,结果具统计学意义。病理检测结果显示,FDSCs注射组表皮增厚,皮肤再上皮化增强。2.FDSCs、ADSCs、HFF-1的细胞形态无明显差异,均呈长梭形、呈典型的成纤维细胞样形态。细胞表面标志物检测显示:三种细胞均表达MSCs相关表面标志物,即CD44、CD73、CD90、CD105呈阳性表达,表达百分比在90%以上;造血细胞相关标志物CD14、CD45、CD34均呈阴性表达;与异体移植免疫排斥相关的表面分子HLA-DR三种细胞均呈阴性表达,但表达百分比FDSCs低于ADSCs和HFF-1。进一步诱导诱导分化实验结果显示,FDSCs、ADSCs均能向脂肪细胞、骨细胞分化,而HFF-1无明显分化迹象。3.对三种细胞的增殖率和迁移率检测结果均表现出:FDSCs最快、HFF-1次之、ADSCs最慢。结论:1.胎儿皮肤来源干细胞能加速裸鼠全层皮肤缺损创面愈合,且中、高剂量组促愈合作用较明显。2.胎儿皮肤来源干细胞可能是一种胎儿皮肤间充质干细胞。3.胎儿皮肤来源干细胞较HFF-1及ADSCs增殖与迁移更快,可能具有更好的创面修复功能。
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