文冠果种仁油中总甾醇的提取纯化、组成分析及抑菌性研究

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文冠果是中国特有的药食两用油料植物,其果实、根、茎、叶等部位均含有大量的生物活性的成分,除了脂肪酸外主要是甾醇、皂苷、植物碱等。植物甾醇经提取纯化后,可应用于抗炎、改善记忆、防治心血管疾病、抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老等多种药物中,实用价值很高,应用前景非常好。为了充分开发利用文冠果资源,本文对文冠果甾醇的提取纯化、组成结构、抑菌效果及机制进行了研究。1.应用正交试验设计对皂化法提取文冠果甾醇的工艺进行了优化。在单因素试验的基础上,考查皂化时间、皂化温度、液料比和萃取剂用量对文冠果总甾醇含量的影响。试验优化获得的文冠果甾醇提取工艺条件为:料液比为1:5(g/mL)、皂化温度为72℃、皂化时间为2 h、乙酸乙酯用量200 mL;经试验验证,可知最佳皂化提取条件下文冠果总甾醇含量为0.498%。影响文冠果甾醇提取物含量的因素依次为萃取剂用量(D)>皂化时间(B)>料液比(A)>提取温度(C)。2.粗甾醇采用溶剂结晶法进行纯化,纯化后文冠果总甾醇含量由14%提高到55%。3.采用气相色谱定性分析了纯化前后文冠果甾醇提物组成,纯化之前仅有两个检出峰,纯化之后检出了五个峰,通过与标准品保留时间值进行对比,确定文冠果种仁油中甾醇提取物含有豆甾醇和p-谷甾醇。进一步用气质联用分析纯化物,结果显示文冠果种仁油中总甾醇中主要含有5种单体,分别是豆甾醇、豆甾-7,22-二烯-3-醇、麦角甾-7,22-二烯-3-酮、p-谷甾醇、33-降柳珊瑚甾-5,24(28)-二烯-3-醇。4.采用滤纸片法考查了文冠果甾醇对常见的细菌的抑制效果。研究结果表明,文冠果甾醇对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌四种受试菌均有一定的抑制效果,且其抑菌效果都随着甾醇质量浓度的提高而加强,当甾醇质量浓度增加到10 mg/mL时,对以上四种细菌均有较强的抑制效果,且其对金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌的抑制效果优于其它二种细菌。5.采用测定生长曲线、电导率法、考马斯亮蓝法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法分别考查了文冠果甾醇对菌体生长代谢、细胞膜通透性、菌体蛋白质含量和菌体利用还原糖能力的影响。结果表明,文冠果甾醇使菌体细胞膜的通透性发生变化,最终导致受试菌体内电解质渗漏,菌体蛋白质的含量下降,文冠果甾醇使菌体蛋白质合成的速度受到抑制;还原糖的消耗速度变慢,菌体利用还原糖的能力下降,从而使细菌的增长受到抑制。试验初步探明了文冠果甾醇对菌体的抑制机制。
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