研究背景:“十八反”属于中药配伍禁忌,其中包括海藻、甘草这一对反药组合,与其他反药组合不同的是,海藻、甘草两味中药本身均无毒,配伍使用是否会“相反”值得探究。2015年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)中记载海藻为马尾藻科植物海蒿子Sargassum pallidum(Turn.)C.Ag.或羊栖菜Sargassum fusiforme(Harv.)Setch.的干燥藻体。现代研究表明海蒿子与羊栖菜的化学成分及药理作用均存在差异。历代关于海藻、甘草同用的文献记载有很多,现代临床应用含这对反药组合的复方治疗相关疾病的报道也并不少见。海藻甘草这一反药组合应用于临床多为在复方中使用,且针对病理条件,此时是否会“相反”值得探究,其中海藻玉壶汤为含海藻甘草反药组合的经典名方,主要用于治疗甲状腺肿大等疾病。课题组前期研究发现针对丙硫氧嘧啶(PTU)导致的甲状腺肿大模型大鼠使用含反药组合的海藻玉壶汤治疗对于大鼠的甲状腺肿大均有一定的纠正作用,西医对于甲状腺肿大除手术外无有效治疗方法,含反药组合的海藻玉壶汤是通过何种机制对甲状腺肿大进行纠正值得探究;并且前期研究发现海藻(海蒿子、羊栖菜)、甘草在《中国药典》规定高限5倍的给药剂量下,海蒿子与生甘草、羊栖菜与生甘草配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠的治疗效果产生了差异。中药配伍禁忌中“相反”可体现为配伍应用产生毒性,如对于心肝肾功能的损害等方面,但对药物的治疗作用是否有影响值得探究。因此在该剂量下海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠治疗效果的差异是否与不同海藻品种及反药组合相关及其作用机制需要进一步探讨。研究目的:本实验探讨含《中国药典》规定高限5倍剂量反药组合的海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大大鼠的药效作用及相关的机制,探究海藻甘草反药组合、海藻品种不同是否对甲状腺肿大大鼠治疗效果产生影响,期望对“十八反”配伍禁忌的本质进行探究,为指导临床使用中药提供参考。研究方法:1药效作用:大鼠称重后,依据体重把大鼠随机分为9组:空白组、模型组、阳性药组、含羊栖菜的海藻玉壶汤全方组(以下简称羊栖菜全方组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤不含甘草组(以下简称羊栖菜去甘草组)、含海蒿子的海藻玉壶汤全方组(以下简称海蒿子全方组)、含海蒿子的海藻玉壶汤不含甘草组(以下简称海蒿子去甘草组)、海藻玉壶汤不含海藻组(以下简称去海藻组)、海藻玉壶汤不含海藻甘草组(以下简称去海藻甘草组),每组16只。造模期间,除空白组大鼠,其余各组大鼠灌服PTU 10 mg/kg,每日1次,共灌服造模药14d。造模后给大鼠灌胃服用治疗药物,周期为28 d,其中,空白组与模型组给予等量生理盐水灌胃,阳性药组大鼠使用优甲乐灌胃,给药剂量为20μg/kg,每日1次,其余各给药组给予相应的海藻玉壶汤加减应用的中药液灌胃,大鼠每日给药1次,给药剂量各组不同:海蒿子/羊栖菜去甘草组给药剂量13.5 g/kg,去海藻组剂量12.6g/kg,海蒿子/羊栖菜全方组剂量18.0g/kg,去海藻甘草组剂量8.1g/kg。给药期间,为了稳定大鼠甲状腺肿大模型,除空白组外,每隔1天,其余各组灌服PTU,给药剂量不变。给药结束后计算各组大鼠甲状腺系数,观察大鼠甲状腺的组织病理形态,检测大鼠甲状腺功能。观察海藻不同品种与生甘草在《中国药典》规定剂量高限5倍剂量下加减应用对甲状腺肿大大鼠药效作用的影响。2机制探讨:检测甲状腺组织TPO、Tg的基因表达,探究含《中国药典》规定剂量高限5倍剂量的不同海藻品种及生甘草的海藻玉壶汤,加减反药组合对甲状腺肿大大鼠甲状腺激素合成的影响机制;检测甲状腺组织Bax、Bcl-2mRNA的表达,探究对甲状腺细胞凋亡的相关影响机制。研究结果:1含高剂量药组合的海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大大鼠药效作用的影响:首先复制甲状腺肿大模型,与空白组比较,模型组大鼠血清T4、FT3、FT4水平显著降低,TSH水平显著升高,甲状腺系数显著升高,大鼠甲状腺组织形态改变:甲状腺组织小叶排列紊乱,小叶结构较模糊,甲状腺滤泡上皮细胞弥漫性增生肥大,甲状腺滤泡大小不均匀,滤泡内分泌物变少。造模大鼠的体重、肛温均较空白组下降,大鼠出现低代谢状态,喜堆聚,反应迟缓,提示模型复制成功;给药治疗后阳性药治疗组纠正了大鼠甲状腺激素下降导致的低代谢状态,回调了降低的体重、肛温及血清T4、FT4、TSH水平,但对甲状腺系数及组织结构形态方面未见改善。海藻玉壶汤加减应用各组对造模大鼠体重、肛温、血清T4、FT3、FT4水降低无显著效果,海藻玉壶汤加减反药组合各组均回调了甲状腺肿大大鼠血清TSH水平;与模型组比较,海蒿子去甘草组、羊栖菜全方组、去海藻组、去海藻甘草组大鼠血清TBG水平升高;海蒿子去甘草组、羊栖菜全方组大鼠血清TRH较空白组升高;各组大鼠血清TPO、Tg水平无显著差;但对甲状腺肿大有显著改善包括甲状腺系数、组织结构形态等方面。2机制探讨2.1对甲状腺激素合成相关基因的影响:在本实验中PTU对大鼠甲状腺组织Tg mRNA表达影响无显著差异,抑制了大鼠甲状腺组织TPO mRNA表达。羊栖菜去甘草组则抑制了大鼠甲状腺组织Tg mRNA的表达,海蒿子去甘草组纠正了PTU对TPO mRNA表达的抑制作用,羊栖菜去甘草组则未能纠正,在促进TPO mRNA表达上,海蒿子去甘草组效果优于羊栖菜去甘草组。海蒿子及羊栖菜全方组效果无显著差异,均未能促进TPO mRNA表达。2.2对甲状腺细胞凋亡的影响:与空白组比较模型组Bax mRNA表达水平降低,Bax/Bcl-2降低,含不同品种海藻的海藻玉壶汤全方及加减海藻甘草反药组合各组可使Bax mRNA表达水平升高,未对Bcl-2mRNA表达产生影响,Bax/Bcl-2升高。研究结论:1含《中国药典》规定高限的5倍剂量海藻不同品种与甘草反药组合的海藻玉壶汤加减反药组合应用各组,对PTU造模导致的甲状腺激素水平下降无显著改善效果,但对TSH均有回调作用,TSH可促进TPO、Tg的生成,大鼠甲状腺组织TPO、Tg mRNA表达结果表明。在纠正甲状腺功能方面海藻玉壶汤中在去掉甘草单独使用高剂量海藻的情况下,海蒿子的效果可能优于羊栖菜,在与甘草配伍使用的情况下海蒿子与羊栖菜并未表现显著差异。海藻玉壶汤中反药组合加减应用各组未表现出显著差异。2含《中国药典》规定高限的5倍剂量海藻不同品种与甘草反药组合的海藻玉壶汤加减反药组合应用各组对甲状腺肿的治疗包括甲状腺系数、甲状腺组织形态结构有显著的治疗效果。其作用机制可能与促进甲状腺细胞的凋亡相关。反药组合加减应用以及不同海藻品种间并未表现出显著差异。