通过组培以及一些分子生物学方面的技术,优化铁皮石斛开花条件。其主要目的是通过试管苗开花授粉得到更多的果荚,为后续胚胎及相关的实验提供物质基础。通过5种不同激素的单因子实验,得到更高的成花植株,并确定花与苗的质量优异。通过对铁皮石斛进行植物组织培养,优化铁皮石斛的开花条件,促进铁皮石斛提前成花;通过石蜡切片技术,观察铁皮石斛在由营养生长到生殖生长的转变过程中,最具代表性的茎尖的细胞切片图,观察细胞发育变化:通过RACE技术克隆出与开花相关的基因序列;采用生物信息学的方法初步分析了这些序列的一些基本性质,包括长度、亚细胞定位、等电点、二级结构等;采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time reverse transcription-PCR,RT-qPCR)对这些基因在不同组织,不同激素条件下的表达模式进行分析,与优化条件相结合并进行分析,可以进一步得到哪些基因与激素促进条件有关。ABA(Abscisic Acid)促进铁皮石斛的试管开花,当在栽培在ABA开花培养基中15-20天,再转移到含0.2mg·L-1 NAA和0.2mg·L-1 6-BA的诱导后培养基中,发芽数量和发芽率显著增加。当Spermidine HCL浓度为0.1 mg·L-1时,其最适宜培养的天数为20天左右,在Spermidine HCL浓度为1.5 mg·L-1时,其最适宜培养的天数为15天左右。花芽诱导率在PP333(Paclobtrazo1)0.6mg·L-1时最高,为24%。花芽诱导率在乙烯利1 mg·L1时最高,为13.3%,其致死浓度一般在2.5 mg·Ll1左右,在此时刻,铁皮石斛在诱导30d后会伴随着茎变黄,叶子枯萎凋零,并最终死亡。TDZ(Thidiazuron)可以缩短营养生长期2-3年,乙烯处理会加速营养生长到生殖生长的转变。根对铁皮石斛的花芽分化具有抑制作用。采用RACE技术,基于转录组数据,得到了 16条开花相关基因的完整cds序列。通过生物信息学的方法,得到了基因的一些基本性质。氨基酸序列长度从237bp到2958bp,分子量从19304.06ku到245735.14ku,所有序列的G+C含量都在0.44-0.54之间。通过实时荧光定量PCR技术,得到基因在不同组织、不同激素处理下的表达情况。基因在激素ABA、spermidine HCL、TDZ等处理下,与组培优化的实验结果相吻合。在用ABA预处理15天左右,铁皮石解的开花率会达到比较高的峰值;基因在激素spermidine HCL处理下,大部分的基因都在21d左右的表达量最高;基因在激素TDZ处理下,大部分的基因都在18d左右的表达量最高。4号基因Flowering Locus T、5 号基因 Flowering time control protein FCA、12 号 Flowering time control protein FPA、14号基因Flowering time control protein FC4和16号基因LEAFY表达模式比较特殊,可以筛选作为花特异性基因。这些实验结果为后续的分子机理的研究打下了基础。