新型晶胶介质及其蛋白质层析性能

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晶胶整体柱在层析分离技术中得到广泛应用,但是存在比表面积小,吸附容量低的缺点。本文针对该问题提出了两种解决方法,同时将晶胶整体柱应用于空间位阻层析中,扩展了晶胶层析材料的应用范围。首先,针对晶胶介质比表面积小的问题,开发了包埋树脂颗粒的方法。将具有合适粒径的形状不规则的高分子树脂颗粒包埋在晶胶骨架中,使晶胶孔隙壁变得粗糙不平,材料的比表面积提高到原来的两倍以上。修饰触须式离子交换基团后,介质对牛血清白蛋白(BSA)吸附量达6mg/mL,为普通晶胶柱的2.8倍,并且在较宽的流速范围内(0.5-20cm/min),吸附量与柱效变化不大,可直接于细菌碱裂解粗料液中对质粒DNA进行粗提,操作快速简便。其次,受限于配基的形态与修饰方法,晶胶材料表面的吸附位点有限,从而导致吸附容量难以提高。针对这一问题,本文提出了二次修饰方法在晶胶材料表面接枝离子交换基团,同时使用包埋颗粒的方法,最终得到具有高吸附容量的晶胶介质,对BSA的吸附量达11.2mg/mL,且适用于快速层析操作。空间位阻层析(SXC)是一种基于聚乙二醇沉淀的层析操作模式,目标蛋白质的保留不依赖其与介质间的直接相互作用。但是高粘度的聚乙二醇流动相限制了其应用。本文将晶胶材料用于该种层析模式,有效解决了流动阻力大、操作压力高的问题,验证了SXC在亲水表面的分离效果,扩展了晶胶材料的应用范围。该方法可用于血清粗料液的处理,能快速实现白蛋白和球蛋白的初级分离,且能对球蛋白实现高倍浓缩。利用电子扫描显微镜观察了SXC操作中球蛋白在晶胶表面的保留状态。另外,利用离子液体单体(乙烯基丁基咪唑氯盐)、两性离子单体(羧基甜菜碱甲基丙烯酸酯)、BSA制备了新型晶胶材料,通过扫描电镜观察其微观结构,结合宏观机械性能初步判断BSA基质晶胶材料可作为层析介质,其余两种晶胶材料不适合作为层析介质。
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