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双孢蘑菇是当今世界上人工栽培面积最广的草腐性食用菌。我国是双孢蘑菇的生产大国,拥有世界第一的出口量。在双孢蘑菇栽培过程中,覆土是一个重要的环节。覆土是双孢蘑菇子实体生长和发育的主要场所,是双孢蘑菇栽培的重要物质基础。本文以双孢蘑菇为研究对象,开展覆土微生物恶臭假单胞菌(P.putida)对双孢蘑菇生长的影响研究,结合荧光标记技术,探究恶臭假单胞菌(P.putida)自身在覆土过程中的定殖能力以及对双孢蘑菇菌丝生长、双孢蘑菇产量和品质的影响。综合各方面因素,确定能够促进双孢蘑菇子实体生长发育的微生物菌剂和用量。具体结果如下:1恶臭假单胞菌(P.putida)TK3属性恶臭假单胞菌(P.putida)TK3的对数期为8—14h,该时期的细菌对抗生素最敏感;菌株TK3具有氨苄霉素(Amp)抗性,不具有卡那霉素(Kana)抗性,对于低浓度(10 ppm、30ppm、50ppm)庆大霉素(Gm)具有抗性,对于高浓度(80ppm、100 pm)Gm不具有抗性;荧光标记后经过阳性鉴定,红色荧光蛋白成功导入菌体并且没有影响菌体本身属性。2恶臭假单胞菌(P.putida)TK3与双孢蘑菇共培养试验通过菌丝直径(平板共培养)、菌丝长度(试管共培养)、菌丝生物量(液体共培养)三个方面发现,菌株TK3、菌株TK3(rfp)分别与双孢蘑菇共培养时均对双孢蘑菇菌丝有促进生长作用,红色荧光蛋白没有影响菌株TK3的促生能力;双孢蘑菇192品种在所有共培养方式中都比双孢蘑菇2000品种具有生长优势。3菌株TK3(rfp)对双孢蘑菇生长、产量和品质的影响覆土层微生物以细菌菌落数最多。细菌数量随菌剂浓度增加而增加,在双孢蘑菇子实体原基形成期数量略下降。菌株TK3(rfp)在覆土层中成功定殖后数量趋于稳定;喷施一定浓度的菌株TK3(rfp)可以增加双孢蘑菇的产量;EM菌剂与菌株TK3(rfp)混合喷施效果好于EM菌剂单一喷施;特定浓度的菌株TK3(rfp)可以提升双孢蘑菇品质。综合覆土微生物群落、双孢蘑菇产量、双孢蘑菇品质等方面因素,建议在实际生产中覆土当天立即使用30 mLTK3(rfp)菌剂(即每克土细胞数为106)进行喷施,作为双孢蘑菇高产优质的新手段。